[发明专利]一种怀山药糖肽的分离纯化方法

说明书

本发明涉及一种怀山药糖肽的分离纯化方法，该方法以干燥怀山药为原料，粉碎，过筛，65℃水提取，离心，浓缩，喷雾干燥，分级醇沉除淀粉，冷冻干燥，将乙醇终浓度85%沉淀部分经阴离子交换树脂和凝胶色谱柱层析纯化，得到怀山药三种糖肽成分CYG‑N‑1、CYG‑N‑2和CYG‑A‑2。利用高效液相色谱，气相与红外光谱法对三种纯化怀山药糖肽进行了理化性质分析。纯度分别达到97.91%，95.91%与92.70%。本发明所述方法简单、操作方便、纯度高、制备成本低、可有效提取三种糖肽成分，易于大规模生产与推广应用等优点。本发明为今后怀山药糖肽的结构分析提供了新的途径，可为怀山药糖肽在功能性食药与药品中的应用开发提供参考。

技术领域

本发明涉及怀山药糖肽的分离纯化方法。

背景技术

蛋白质糖基化在生物体内起着重要的作用，它不仅参与蛋白质翻译调控、蛋白质降解、免 疫保护和信号转导调控等许多生物学过程，而且对蛋白质的结构、溶解性等特性也有重要影响， 对蛋白质水解的电荷或敏感性。糖肽(Glycopeptides)包含聚糖与多肽。糖肽连键的主要类 型有两种：一，N-糖肽键，是指β-构型的N-乙酰葡糖胺异头碳与天冬酰胺的γ-酰胺N原子 共价连接而成的N-糖苷键。二，O-糖肽键，是指单糖的异头碳与羟基氨基酸的羟基O原子共 价结合而成的O-糖苷键。由于聚糖在所有生物体细胞中无所不在，并且糖肽有保持健康和防 止疾病作用，糖生物学领域出现了分子方面的研究。此外，还开发出治疗某些感染类型的糖肽 类抗生素。糖肽是通过肽合成过程生产出来的。在此过程中，聚糖绑定多肽，并与其它聚糖结 合氨基酸联系在一起，直到产生一个链。新产生的多肽随后通过糖基化绑定蛋白质和脂质。这 一酶催化过程让糖肽影响细胞之间的生化沟通。因此，这些多肽在生物体生命过程中有很重要 的生物学作用。细胞产生皮肤和有机组织，并有抵御疾病，帮助身体保持体内平衡等作用。体 液中糖蛋白和糖肽含量的变化通常反映人体的生理状态。糖生物学试图确定糖肽的分子结构， 并进一步探索这些多肽在与人体其它相关细胞和分子中的功能。通过确定糖肽结构，进一步了 解它们的机制，糖生物学领域工作者能生产出有助于促进健康和延长寿命的治疗方法。例如， 糖肽包含一种特质在癌细胞扩散前必须被分解；因此，了解糖肽结构能让科学家创造一种防止 糖肽变质和抑制癌细胞扩散的方法。因此，对体液中糖蛋白和糖肽进行定量和定性分析，对筛 选和发现临床疾病生物标志物具有重要意义。

山药为薯蓣科植物薯蓣(Dioscorea opposita Thunb.)的干燥根茎，是传统的药食同源原料， 因其有较好的药用价值和可口的风味深受世人喜爱。山药在东南亚、西非和加勒比海地区是相 当大的田间作物。山药是我国传统的药食同源类植物之一，在我国的栽培历史较久，记载于《本 草纲目》、《中药大词典》等书。分布于我国的华北、西北及长江流域各省区。以河南作为其道 地产区及主产区，炮制品规格为炒山药。江苏淮安地区是我国山药主要产区之一，所以，山药 俗称淮山药或怀山药。山药作为常用中药材，应用历史十分悠久。早在《神农本草经》中已将 其列为上品药材，认为其补中，益气力，长肌肉，久服耳目聪明，轻身，不饥，延年。传统上， 常食用山药可治疗脾虚久泻、慢性肠炎、肺虚咳喘、慢性胃炎、糖尿病等症。山药被作为主食 食用，富含多糖、氨基酸、淀粉、脂肪酸、多酚和皂苷等活性成分。山药含大量的粘液，很滑， 它是一种多糖肽质的混合物，主要成分为黏蛋白和甘露聚糖，山药块茎中积累的糖肽使山药之 所以具有这些功效，主要是因为其中所含有的糖肽等有效成分对人体有特殊的保健作用。此外， 山药粘液中的糖肽是一种天然的抗氧化剂，并该糖肽具有较高的降血糖作用。因此提取山药糖 肽，开发以其为主要成分的功能食品，对于提高人们的健康水平具有很重要的意义。

山药具有增强免疫、抑制肿瘤、降低血糖、减少血脂、抗衰老等药理作用。山药具有广阔 的应用前景和商业价值，目前，山药用于保健性食品开发已经取得了一些可喜的成果，但在山 药单一的重要的活性成分糖肽的开发利用方面还有较大的发展空间。为了适应开发需求与市场 需要，在寻求较好品质、较高产率的糖肽的基础上，研发怀山药糖肽的提取纯化方法与其应用 非常必要。该方法适用于总多糖含量高、单糖种类多，糖肽含量高但干扰因素多(如淀粉、皂 苷含量高)的提取方法。

发明内容