[发明专利]用于免疫组化检测的DAB显色试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种用于免疫组织化学检测的DAB显色试剂盒，属于免疫组化检测技术领域。所述DAB显色试剂盒包括DAB缓冲液和DAB色原，所述DAB缓冲液包括咪唑、4‑壬基苯基‑聚乙二醇、苯扎氯铵、过氧化氢、EDTA溶液和焦磷酸钠；所述DAB色原包括：1,2‑丙二醇和3,3‑二氨基联苯胺四氯盐水合物，进一步，所述试剂盒还包括DAB增强剂，所述DAB增强剂包括硫酸铜、氧化钠、氧化钾、蔗糖和苯扎氯铵。本发明进一步公开了所述DAB显色试剂盒的应用。利用本发明的DAB显色试剂盒进行免疫组化检测，能够显著提高染色强度和灵敏度，并且本发明的DAB显色试剂盒组分简单，易于配制，具有极佳的稳定性。

技术领域

本发明属于免疫组化检测技术领域，具体地，涉及一种用于免疫组化检测的DAB显色试剂盒及其应用。

背景技术

免疫组织化学(简称免疫组化)是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的底物显色，来确定组织中是否有目标抗原及其表达情况的检测方法。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质，对其进行定位、定性及定量的研究。免疫组化技术的不断发展，给临床病理和科研项目带来了很大帮助。

在免疫组化操作过程中，显色是一个很重要的环节。显色时选用不同的显色剂，可以使终产物形成不同的颜色。DAB染色法以其显色终产物的稳定性强，及切片可脱水、透明、长期保存等优点而被广泛应用于免疫组化。

DAB染色法也叫二氨基联苯胺法，是过氧化物酶的显色底物，适用于辣根过氧化物酶HRP标记的免疫印记或免疫组化反应，用于检测细胞中过氧化物酶的活性部位。其原理是：细胞颗粒中的过氧化物酶，能将过氧化氢中的氧释放出来，氧化二氨基联苯胺，形成棕黄色沉淀而定位于过氧化物酶活性的部位，显色充分后将标本及时脱水封固，其终产物可直接在光镜下观察。

DAB试剂盒的配制方法和浓度对免疫组织化学的检测强度及显色稳定性起关键作用。现有免疫组织化学法使用的DAB试剂盒组分多样，大多存在以下问题：(1)过氧化氢含量的多少将影响免疫组化显色的强度及稳定性。过氧化氢含量过低将导致显色过弱或显色时间延长，过氧化氢超过适宜浓度将使反应过快而背景加深。因过氧化氢在一般环境中会缓慢分解成水和氧气，而导致常规DAB底物缓冲液中过氧化氢稳定性较差、效期较短；(2)有些DAB显色试剂盒为保护过氧化氢及延缓DAB氧化作用，会添加各种保护剂或稳定剂，而使其组分成分复杂工艺繁琐；(3)常规DAB试剂盒对低丰度抗原的检测敏感度低；(4)常规DAB试剂盒中，色原与底物缓冲液混合后，需现配现用，不能长时间保存。

发明内容

为了解决上述技术问题中的至少一个，本发明旨在提供一种新型的DAB试剂盒及其制备方法，可以提高针对低丰度抗原进行免疫组化检测的强度、灵敏度和稳定性。为此，本发明采用的技术方案如下：

本发明第一方面提供一种用于免疫组织化学检测的DAB显色试剂盒，包括DAB缓冲液和DAB色原，所述DAB缓冲液包括咪唑、4-壬基苯基-聚乙二醇、苯扎氯铵、过氧化氢、EDTA溶液和焦磷酸钠；所述DAB色原包括：1,2-丙二醇和3,3-二氨基联苯胺四氯盐水合物。

在本发明的一些实施方案中，在DAB缓冲液中，所述咪唑的摩尔浓度为25mM-100mM，所述4-壬基本基-聚乙二醇的体积分数为0.05％～0.2％，所述苯扎氯铵的体积分数为0.005％～0.02％，所述过氧过氢的质量分数为0.02％～0.04％，所述焦磷酸钠的质量分数为0.05％～0.2％，所述EDTA的摩尔浓度为50nM～100nM。

在本发明的一些具体实施方案中，在DAB缓冲液中，所述咪唑的摩尔浓度为50mM，所述4-壬基本基-聚乙二醇的体积分数为0.1％，所述苯扎氯铵的体积分数为0.01％，所述过氧过氢的质量分数为0.03％，所述焦磷酸钠的质量分数为0.1％，所述EDTA的摩尔浓度为100nM。

在本发明的一些实施方案中，所述DAB缓冲液的pH值为7.2～7.6。