[发明专利]一种炎性衰老细胞模型的构建方法和应用

说明书

本发明公开了一种炎性衰老细胞模型的构建方法和应用。属于细胞生物学技术领域。包括用脂多糖注刺激小鼠腹腔巨噬细胞，构建炎性衰老细胞模型。发明利用浓度为0.25～8μg/mL脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞系RAW264.7细胞24小时构建炎性衰老细胞模型。0.25～8μg/mL脂多糖刺激RAW264.7细胞24小时，可以诱导炎性衰老反应的发生。细胞形态发生明显改变，分泌IL‑1α、IL‑6、TNF‑α等炎性因子，产生衰老相关β‑半乳糖苷酶。生成活性氧(ROS)，衰老先关异染色体聚集。可用于构建细胞炎性衰老模型，进行抗炎性衰老分子机制研究及抗炎性衰老药物的研发，为延缓及和治疗炎性衰老提供细胞模型。

技术领域

本发明涉及细胞生物学技术领域，更具体的说是涉及一种炎性衰老细胞模型的构建方法和应用。

背景技术

促炎状态的同时进行性增加是衰老过程的主要特征，C.Franceschi等在2000年首次将这种现象称为“inflamm-aging”，后由夏世金等人将其翻译为“炎性衰老”。炎性衰老被视为决定机体衰老进程的重要因素，与严重的老年病，如心血管疾病，2型糖尿病及神经退化性疾病的发生发展相关。现有关炎性衰老的主要学说有，氧化炎症学说、应激学说、DNA损伤学说、细胞因子学说、自噬学说等。在炎性衰老中，氧化应激、炎症与衰老三者之间互为因果关系，可导致各种细胞因子、自由基、氧化酶类等炎性衰老介质产生。促炎细胞因子在炎症衰老中起重要作用，由于持续和低强度刺激可导致炎症无法进入稳定的抗感染和组织损伤修复状态，循环中高水平的促炎细胞因子为组织和器官创造了炎性环境，进而导致氧化应激及衰老的发生，而氧化应激会导致衰老并影响体内的稳态和健康。

巨噬细胞起源于骨髓前体细胞，是广泛分布于机体的免疫细胞，在机体先天免疫及获得性免疫中发挥着重要的防御作用。在某些细菌成分刺激下，感染部位组织细胞产生的IFN-γ、MIP-1α、GM-CSF等细胞因子，感染周围组织中的巨噬细胞被募集到炎症反应部位，并被活化，以增强局部抗感染能力。活化后的巨噬细胞是保护生物体对抗感染的第一道防线，能够有效吞噬病原介质，抵抗机体的炎症反应及组织损伤。研究表明，巨噬细胞衰老是炎性衰老的重要起因之一，在炎性衰老中发挥着不可忽视的作用，巨噬细胞在炎症衰老中的主要作用，与巨噬细胞可导致衰老相关的分泌表型引起的炎性介质的释放增加有关。故，以巨噬细胞为研究对象，探讨药物对炎性衰老的影响越来越受到研究者的关注。

因此，如何提供一种炎性衰老细胞模型是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种炎性衰老细胞模型的构建方法和应用。其中，脂多糖是由革兰阴性菌释放的一种内毒素，在体内可以通过细胞信号转导系统激活单核巨噬细胞、内皮细胞、上皮细胞等，调节各种炎性介质表达的先天性及适应性免疫应答来诱导各种细胞中的炎症，具有免疫调节作用。脂多糖一般呈集聚状态，在脂多糖结合蛋白的作用下，脂多糖优先与单核巨噬细胞和中性粒细胞表面上的膜分子结合，导致细胞活化，巨噬细胞由脂多糖诱导后可极化成M1型，随后释放大量的炎性细胞因子，这些细胞因子可以使巨噬细胞被募集到炎症反应部位，同时参与细胞内炎性反应过程，清除相关病原体，发挥免疫调节作用，并进一步诱导活性氧迸发，继而引发炎性衰老。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种炎性衰老细胞模型的构建方法，包括：用脂多糖刺激小鼠腹腔巨噬细胞，构建炎性衰老细胞模型。

优选的：脂多糖的浓度为0.25～8μg/mL，所述刺激时间为24h。

优选的：脂多糖的浓度为1μg/mL。

优选的：小鼠腹腔巨噬细胞为RAW264.7。

优选的：小鼠腹腔巨噬细胞培养于含有10％热灭活胎牛血清，1％青霉素、链霉素的RPMI1640培养基中，37℃，5％CO₂培养箱中培养，并选择处于对数生长期的细胞用于构建炎性衰老细胞模型。