[发明专利]一种白桦转录因子BpRAV1基因及其表达载体和应用

说明书

本发明公开了一种白桦转录因子BpRAV1基因及其表达载体和应用，白桦转录因子BpRAV1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；将BpRAV1基因的全长编码区序列克隆到pROK2载体中CaMV 35S启动子的下游，构建过表达植物载体pROK2‑BpRAV1；截取BpRAV1基因编码区自起始密码子开始的一段长为268bp的序列，将这段序列分别正向和反向地插入到pFGC5941载体中，构建抑制表达载体pFGC5941‑BpRAV1。本发明通过瞬时转化方法使BpRAV1基因在白桦中过量表达或抑制表达，在培育抗旱耐盐转基因植物品种中将具有广泛的应用。

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种白桦转录因子BpRAV1基因及其在培育抗旱耐盐植物中的应用。

背景技术

转录因子，又被叫做反式作用因子，是一类能够特异性识别并结合存在于真核生物基因启动子上的顺式作用元件的蛋白质。植物作为固着生长的生物，直接暴露于高盐、干旱、寒冷等各种环境胁迫下，为了减少逆境胁迫的不利影响，植物细胞会通过多种信号传导途径，如脱落酸、赤霉素和乙烯等介导的信号传导途径，将胁迫信号传递给参与胁迫应答的转录因子，进而由它们激活下游相关胁迫应答基因的表达，最终导致生理和代谢发生变化，使植物产生抗逆反应。

RAV是植物特有的一类含有AP2结构域和B3结构域的转录因子。已有研究表明，RAV转录因子在植物多种生物学过程中起作用，包括植物生长发育、对逆境胁迫的防御反应和激素信号传导等。过量表达GmRAV的转基因烟草表现为生长速度降低、根系伸长受抑制以及开花时间延迟，表明GmRAV可能在植物生长发育过程中发挥重要作用。过量表达辣椒CaRAV1的拟南芥植株对病原菌的抗性明显增强。GmRAV-03的过量表达可以增加转基因拟南芥对高盐和干旱的抗性，并导致转基因植株对外源ABA不敏感。在拟南芥和大豆中，GmRAV1通过细胞分裂素信号通路调控根和茎的再生。

白桦（Betula platyphylla）是主要的阔叶树种之一，桦木科桦属，其生长迅速，适应性和抗逆性较强，是研究耐盐抗旱机理和进行耐盐抗旱基因克隆的理想材料。尽管RAV转录因子已被发现参与了植物的多种生物学过程，但目前的研究多集中在拟南芥、水稻等草本植物中，对木本植物的研究相对缺乏，并且对于RAV基因的功能，例如它们调控植物抗逆反应的分子机制等，还有待深入研究。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是提供一种白桦转录因子BpRAV1基因。本发明的另一目的是提供白桦转录因子BpRAV1基因在白桦抗旱耐盐育种中的应用。

为了实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案：

一种白桦转录因子BpRAV1基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

白桦转录因子BpRAV1基因的表达蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供了一种含有所述白桦转录因子BpRAV1基因的表达载体。

本发明还提供了一种含有白桦转录因子BpRAV1基因的表达载体的构建方法，将如SEQ ID NO.1所示的BpRAV1基因的全长编码区序列克隆到pROK2载体中CaMV 35S启动子的下游，构建过表达植物载体pROK2-BpRAV1；截取如SEQ ID NO.1所示的BpRAV1基因编码区自起始密码子开始的一段长为268 bp的序列，将这段序列分别正向和反向地插入到pFGC5941载体中，构建抑制表达载体pFGC5941-BpRAV1。

本发明还提供了一种白桦转录因子BpRAV1过表达与抑制表达白桦植株的获得方法，将过表达载体pROK2-BpRAV1和抑制表达载体pFGC5941-BpRAV1，分别通过农杆菌介导的瞬时转化体系转化野生型白桦组培苗，构建白桦BpRAV1基因的过表达与抑制表达植株。