[发明专利]地耳草内生真菌菌株HUBU0122及其应用

说明书

本发明涉及地耳草内生真菌菌株HUBU0122及其应用。该内生真菌命名为链格孢属菌（Alternaria sp.)HUBU0122，其菌种保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地址为湖北省武汉市八一路299号，保藏日期为2021年4月19日，保藏编号为CCTCC No.M2021414。该菌对沙门氏菌和水稻黄单胞菌具有抑菌作用，可作为植物内生真菌的利用资源，以为获得抗植物病原真菌病害的新型农用抗生素类天然成分奠定基础。

技术领域

本发明涉及地耳草内生菌技术领域，尤其涉及地耳草内生真菌菌株HUBU0122及其应用。

背景技术

地耳草（Hypericum japonicumThunb. ex Murray），别名香草、田基黄，是常用的药用植物之一。地耳草分布广泛，在中国主要分布于辽宁、山东至长江以南各省区，生长于海拔2800米以下比较潮湿的土地包括田边、沟边、草地以及撩荒地上。其全部组织和器官均能制成药物，能清热止血，有解毒消肿的作用，对治疗慢性肝炎、跌打损伤以及传染性疮毒有显著效果。

根据现代药理学的最新研究结果显示，地耳草中主要含有多种黄酮类、内酯类、酚类、糖类物质和鞣质，能在不同的程度上有效抑制多种致病菌，其中主要包括金黄色葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌等。据报道，地耳草的水提取物具有广谱抑菌活性（除铜绿假单胞杆菌）。但是直接从植物中提取获得抗菌活性成分存在一定的局限性，例如：产率通常仅为0.01%~0.03%；产物受季节、地理位置和环境、气候等因素制约而影响其重现性；植物资源的过度开采使许多植物已濒临枯竭。

近年来科研工作者发现，具有特殊生理活性的代谢产物与特殊生长环境下的微生物存在紧密的关系，几乎已经发现的所有植物中都会含有内生真菌，这些真菌长期生活在寄主植物内的微环境中，与寄主植物一起进化，而且在这个过程中它们还可能产生与其寄主植物或相同或相似的活性化学物质。然而，现有技术并未公开相关地耳草具有相关的内生微生物。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在提供一种地耳草内生菌，以其减少直接从地耳草内提取活性成分，减少对地耳草的过度开发。

第一方面，本发明实施例公开了一株地耳草内生真菌菌株，其命名为链格孢属菌（Alternaria sp.)HUBU0122，其菌种保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地址为湖北省武汉市八一路299号，保藏日期为2021年4月19日，保藏编号为CCTCC No. M2021414。

第二方面，本发明实施例公开了第一方面涉及的地耳草内生真菌菌株HUBU0122或其代谢产物在制备抑菌剂中的应用。

在本发明实施例中，所述抑菌剂包括使用甲醇对所述地耳草内生真菌菌株HUBU0122的代谢产物进行提取的提取物。

在本发明实施例中，所述提取物的制备方法包括以下步骤：将地耳草内生真菌菌株HUBU0122于PDA培养基中发酵培养，得发酵液，纯化提取即可得所述提取物。

在本发明实施例中，所述发酵过程中，先将地耳草内生真菌菌株HUBU0122接种于PDA的固体培养基上进行活化7天后，再将其转接至含青霉素、链霉素的PDA液体培养基中进行发酵。

在本发明实施例中，所述发酵过程中，将发酵液用甲醇静置浸泡提取，提取时间为6-8 h，按此法连续提取3次后，过滤，滤液浓缩干燥即可得所述提取物。

在本发明实施例中，在甲醇浸泡过程中，还对发酵液进行了超声处理，超声频率10~50 KHz，并控制温度40 ℃。

与现有技术相比，本发明至少具有以下有益效果：