[发明专利]用于消除蔬菜酶联免疫检测基质效应的简便快速前处理方法

说明书

本发明属于农药残留免疫检测技术领域，涉及一种用于消除蔬菜酶联免疫检测中基质效应的简便快速前处理方法，包括：对蔬菜中的待测物进行提取，得到提取液；对提取液进行磺基水杨酸处理，磺基水杨酸处理完成后，调节pH值，得到用于酶联免疫检测的待测样品。本发明以绿色蔬菜为样品，确定了叶绿素为样品提取液中对酶联免疫吸附试验(ELISA)存在不利影响的主要物质，构建了基于磺基水杨酸的新型前处理方法，能够有效消除基质干扰，并通过对蔬菜样品的前处理优化可实现对多种不同蔬菜样品的免疫快速检测，该研究具有良好的实际应用价值，同时为发展和改进此类绿色蔬菜的免疫分析技术相应的预处理方法提供有益的思路。

技术领域

本发明属于农药残留免疫检测技术领域，尤其涉及用于消除蔬菜酶联免疫检测基质效应的简便快速前处理方法。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

各类免疫分析已经逐步用于蔬菜中农药残留等危害物的快速检测，典型的如酶联免疫吸附测定(ELISA)、胶体金免疫层析检测等。与气相色谱、液相色谱等基于大型仪器的检测技术相比，免疫检测技术的主要特点和优势在于较为简单、快速、经济，更适合于大量样本的现场快速筛选。然而在对各类蔬菜样品进行ELISA实际检测过程中常常观察到较为明显的基质效应，即基质中共存组分对于免疫分析的强烈干扰作用，从而导致检测灵敏度和准确度的降低。尽管可以通过稀释样品提取液以及固相萃取柱提取净化等方式来消减这种基质效应，然而在此过程中分析方法的简单性和灵敏度同样会受到影响。

之前关于鱼类等动物性产品的研究中发现，某些蛋白质是导致免疫检测基质效应的主要因素之一，而采用磺基水杨酸可以通过有效去除蛋白质而达到消除基质干扰的目的。蔬菜产品中的化学组成与鱼类等存在明显差异，其蛋白含量大大低于动物性产品，推测并非主要的干扰物质，因此难以简单沿用之前的研究成果。目前关于蔬菜免疫检测基质效应的主要来源，之前仍未明确。因此，如何简便有效地消除干扰作用，缺乏针对性的技术方法。通过本课题组的前期研究，已经证实蔬菜样本中的叶绿素是导致基质效应的主要因素之一，但是尚未找到较好的去除方法，在去除叶绿素的同时，往往会对后续的酶联免疫检测产生负面影响，导致检测的准确度、灵敏度和精确度下降。

发明内容

针对现有技术中的不足，本发明提供一种用于消除蔬菜样品免疫检测基质效应的简便快速前处理方法。本发明以韭菜等绿色蔬菜为样品，以腐霉利为代表性检测对象，研究确定了叶绿素为样品提取液中对酶联免疫吸附试验(ELISA)存在不利影响的主要物质之一，并尝试了多种叶绿素去除方法，例如：活性炭吸附等，但对叶绿素的去除效果不理想或会对后续酶联免疫吸附试验造成较大影响。因此，发明人经过系统分析和大量实验摸索，偶然发现：磺基水杨酸可以很好地去除叶绿素，且不会对后续酶联免疫吸附试验造成较大影响。因此，基于磺基水杨酸建立了能有效去除叶绿素、从而显著消除基质效应的前处理方法，能够实现具有较高灵敏度、较强特异性以及稳定性的腐霉利酶联免疫快速检测，并通过对蔬菜样品的前处理优化可用于多种不同蔬菜样品。该研究具有良好的实际应用价值，同时为发展和改进此类绿色蔬菜的免疫分析技术相应的预处理方法提供有益的思路。

为实现上述技术目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一个方面，提供了一种蔬菜酶联免疫检测中基质干扰的消除方法，包括：

对蔬菜中的待测物进行提取，得到提取液；

对提取液进行磺基水杨酸处理，酸处理完成后，调节pH值，得到用于酶联免疫检测的待测样品。

研究发现：食品中的叶绿素等色素对腐霉利免疫化学反应存在基质干扰，因此，本发明研究了针对于这一具体基质成分的新型消除方法，简化了样品前处理步骤。

本发明的第二个方面，提供了上述磺基水杨酸处理在消除蔬菜酶联免疫检测中基质干扰中的应用。