[发明专利]一种硒化青蛤多糖的制备方法

权利要求书

1.一种硒化青蛤多糖的制备方法，其特征在于，由以下步骤制备：S1，提取青蛤多糖；S2，制备磺酸甲基咪唑氯多孔磁性纳米粒子；S3，合成硒化青蛤多糖；

所述步骤S3具体包括以下方法：(1)取青蛤多糖加入到DMSO中，75-85℃下搅拌3-4h，冷却至室温，得青蛤多糖悬浮溶液；(2)N₂气保护下，取硒试剂加入到DMSO，然后加入磺酸甲基咪唑氯多孔磁性纳米粒子，75-85℃下搅拌2-3h，得活化硒溶液；(3)N₂气保护下，将青蛤多糖悬浮溶液滴加到活化硒溶液，75-85℃下持续搅拌反应4-5h，通过磁析法回收磺酸甲基咪唑氯多孔磁性纳米粒子并用DMSO洗涤，然后过滤，DMSO洗涤滤饼，然后7000-8000r/min离心5-10min，取上清液，加入2-3倍的丙酮进行洗涤，重复上述方法洗涤，沉淀5-7次，直至丙酮层加入2％抗坏血酸未变红后停止洗涤。加入蒸馏水至沉淀层，并搅拌致沉淀层完全溶解，倒置透析袋中流水透析40-48h，待透析完成后使用2％的抗坏血酸检测未变红(如颜色变红需继续透析)，然后将透析液再次7000-8000r/min离心5-10min，取其上清液60-80℃下浓缩，加入丙酮进行沉淀，冷冻干燥40-48h，得硒化青蛤多糖。

2.根据权利要求1所述的一种硒化青蛤多糖的制备方法，其特征在于所述的硒试剂结构为：

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3.根据权利要求1所述的一种硒化青蛤多糖的制备方法，其特征在于，所述的青蛤粗多糖由以下方法制备：(1)将鲜活青蛤洗净，去壳，取内脏组织置于78-82％乙醇浸没，2-3天后取出，破碎匀浆，然后加入同浓度的乙醇浸泡，每隔5天倒出乙醇溶液，并加入等量75％乙醇，4周后弃去乙醇浸泡液，将青蛤匀浆液离心，保留沉淀物60-70℃烘干，得青蛤组织粉；(2)取青蛤组织粉，加入20倍的蒸馏水，100-110℃水浴提取，然后离心，过滤、浓缩，并加入无水乙醇至体积分数为75％，充分振荡，4℃下静置12h后，离心，保留沉淀物，于60-70℃下烘干，得青蛤多糖粗提物；(3)将青蛤多糖粗提物用10倍去离子水充分溶解，加入20％体积的Sevag试剂(氯仿:丁醇＝5:1)，振荡25-35min后静置10min，4000r/min离心10min，体系分成三层，保留中间层清液，重复3次，合并所得中间层清液，于40-50℃减压浓缩，然后加无水乙醇至体积分数为90％，充分振荡，4℃下静置12h后，离心，保留沉淀物，于60-70℃下烘干，得青蛤多糖。

4.根据权利要求1所述的一种硒化青蛤多糖的制备方法，其特征在于，所述磺酸甲基咪唑氯多孔磁性纳米粒子由以下方法制备：(1)将Fe₃O₄均匀分散到氯仿中，同时将十二烷基三甲基溴化铵超声溶解于去离子水中，然后将Fe₃O₄的氯仿溶液滴加到十二烷基三甲基溴化铵的水溶液中形成油包水的反相微乳液，加热到55-65℃，保持10-15min，使氯仿蒸发掉，然后加蒸馏水稀释20倍，再依次加入氨水、TEOS、EtOAc，800-1000rpm搅拌反应3-4h，然后离心，依次用乙醇、酸性乙醇清洗沉降物，以除去有机物，最终得到多孔SiO₂包裹的Fe₃O₄的多孔磁性粒子；(2)将1-甲基咪唑和3-甲氧基氯苄混合，100-110℃下加热搅拌5-6h，然后加入多孔磁性粒子，搅拌均匀，然后冰浴冷却，缓慢加入冷的浓硫酸，室温下搅拌4-5h，乙酸乙酯洗涤，真空干燥，得磺酸甲基咪唑氯多孔磁性纳米粒子，为浅黄色粘性固体。

5.根据权利要求1所述的一种硒化青蛤多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤S3具体方法(1)步骤中青蛤多糖:DMSO的质量体积比为：3-4g:300-400mL；所述步骤S3具体方法(2)步骤中硒试剂:DMSO:磺酸甲基咪唑氯多孔磁性纳米粒子的质量体积比为：7-8g:350-400mL:8-10g；所述的滴加速度为15-20滴/min。

6.根据权利要求3所述的一种硒化青蛤多糖的制备方法，其特征在于，所述的离心速度为5000r/min，离心时间为20min。