[发明专利]生物标志物的检测方法及检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种生物标志物的检测方法及检测试剂盒，该生物标志物为目标miRNA和端粒酶中的任意一种或两种，该方法为：将待测样品、被氧化石墨烯荧光淬灭后的DNA模板化银纳米簇混合物H2‑AgNCs@GO、辅助链AS、TP链和发夹DNA探针H1混合反应，通过检测反应产物的荧光强度，计算得到待测样品中的生物标志物的浓度。本发明利用DNA模板银纳米簇为荧光信号，结合荧光共振能量转移及杂交链式反应的信号放大性能，实现了miRNA和端粒酶的高灵敏度、高特异性的荧光检测。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别涉及一种生物标志物的检测方法及检测试剂盒。

背景技术

MicroRNA(miRNA)和端粒酶是重要生物标志物，具有很高的医学价值，尤其是两种生物标志物的共同检测具有很好的应用价值。目前，被广泛报道用于端粒酶活性和miRNA分析的检测方法主要包括基于聚合酶链反应(PCR)的经典端粒重复扩增(TRAP)和基于纳米材料的传感平台等。尽管这些方法有较好的灵敏度和特异性，但仍存在检测目标物单一，成本较高、耗时长、操作复杂等缺点。因此，有必要开发一种快速、简单、能够同时检测多种目标物的方案。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足，提供一种生物标志物的检测方法及检测试剂盒。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：提供一种生物标志物的检测方法，该生物标志物为目标miRNA和端粒酶中的任意一种或两种，该方法为：将待测样品、被氧化石墨烯荧光淬灭后的DNA模板化银纳米簇混合物H2-AgNCs@GO、辅助链AS、TP链和发夹DNA探针H1混合反应，通过检测反应产物的荧光强度，计算得到待测样品中的生物标志物的浓度；

其中，DNA模板化银纳米簇H2-AgNCs是通过发夹DNA探针H2、硝酸银和硼氢化钠反应合成得到，H2-AgNCs与氧化石墨烯混合后，氧化石墨烯吸附发夹信号探针H2的单链环结构，并通过荧光共振能量转移淬灭H2-AgNCs的荧光，得到H2-AgNCs@GO；

其中，TP链上具有端粒酶特异延伸序列、与辅助链AS互补配对的序列以及与目标miRNA互补配对的序列，游离的AS在发夹DNA探针H1、H2存在下能够触发杂交链式反应；

在目标miRNA存在的情况下，目标miRNA与TP链互补，结合在TP链上的辅助链AS被置换出来，触发发夹DNA探针H1、H2进行杂交链反应，使H2-AgNCs从氧化石墨烯上释放，H2-AgNCs的荧光得到恢复；

在端粒酶存在的情况下，端粒酶延长TP链产生核苷酸重复序列，TP链两端互补形成发夹结构并释放出结合在TP链上的辅助链AS，触发发夹DNA探针H1、H2进行杂交链反应，使H2-AgNCs从氧化石墨烯上释放，H2-AgNCs的荧光得到恢复。

优选的是，该方法包括以下步骤：

1)合成DNA模板化银纳米簇H2-AgNCs：

将发夹DNA探针H2与硝酸银溶液在PBS中混合，加热反应，然后冷却到室温，再向反应后的溶液中加入硼氢化钠，搅拌，反应后得到H2-AgNCs，黑暗条件下保持；

2)合成H2-AgNCs@GO：

将步骤1)制得的H2-AgNCs与氧化石墨烯溶液混合，搅拌，反应后得到被氧化石墨烯荧光淬灭后的DNA模板化银纳米簇混合物H2-AgNCs@GO；

3)将待测样品与反应物：H2-AgNCs@GO、辅助链AS、TP链和发夹DNA探针H1混合，反应完成后，检测反应产物的荧光强度，再根据预先建立的表征生物标志物的浓度与反应产物的荧光强度之间的关系的标准曲线，计算得到待测样品中的生物标志物的浓度。

优选的是，其中，当待测样品中的生物标志物包括端粒酶时，步骤3)中的反应物还包括端粒酶延伸液。