[发明专利]一种鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条及其检测方法

权利要求书

1.一种鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条，其特征在于，所述试纸条自一端至另一端依次设有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；

所述硝酸纤维素膜上设有质控线和检测线；所述检测线靠近所述金标垫一端设置，所述质控线靠近所述吸水垫一端设置；

所述金标垫上设有与胶体金偶连的单克隆抗体，所述单克隆抗体由保藏号为D8的杂交瘤细胞株分泌产生；所述检测线由保藏号为E8的杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体构成；所述质控线由羊抗鼠抗体构成。

2.根据权利要求1所述的鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条，其特征在于，还包括一块背衬，所述样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫均承载于所述背衬上。

根据权利要求1所述的鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条，其特征在于，在与胶体金偶连的单克隆抗体中，所述胶体金的粒径为30～40nm，所述胶体金与单抗的质量体积比为3μg/mL。

3.根据权利要求1所述的鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条，其特征在于，所述胶体金的最适pH确定如下：

取多组胶体金溶液，每组溶液中加入不同量的0.2mol/L碳酸钾调整溶液调节所述胶体金溶液的pH，并且加入D8单克隆抗体进行反应，随后加入10μL10％NaCl溶液持续反应，进行离心操作，离心后观察到胶体金颜色最红，无聚沉、无褪色或变色现象的该组胶体金溶液为胶体金的最适pH。

4.根据权利要求3所述的鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条，其特征在于，D8单克隆抗体与胶体金偶联的最佳结合量为：

取多组最适pH的胶体金溶液，每一组加入不同量的D8单克隆抗体，反应后，每一组均加入10μL 10％NaCl溶液，取颜色最红且抗体用量最少的为最小结合量xμg/mL，为保证胶体金完全与D8单克隆抗体结合，以x+x×2为最佳结合量。

5.根据根据权利要求4所述的鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条，其特征在于，与胶体金偶连的单克隆抗体制备如下：胶体金pH调节至最佳pH值，按D8单克隆抗体与胶体金偶联的最佳结合量吸取抗体，以40μL/min滴加到胶体金溶液中，同时在磁力搅拌器上搅拌，待抗体加完后于4℃环境中持续搅拌1h，加入所述胶体金溶液1/10体积的含10％BSA的PB溶液，搅拌1h，移入离心管1000rpm离心10min，小心吸取上清至新离心管，将上清12000rpm离心10min，弃上清，沉淀用原胶体金溶液1/10体积的重悬液重悬，混合均匀后4℃保存备用。

6.一种鲍氏志贺氏菌的检测方法，使用如权利要求1-5中任意一项所述的鲍氏志贺氏菌免疫胶体金检测试纸条，其特征在于，样品滴在样品垫上，顺着金标垫、硝化纤维素膜和吸水纸的方向层析；

若样品中含有目标细菌，目标细菌与金标垫上的胶体金偶联的单克隆抗体结合，形成胶体金偶联抗体—细菌复合物，所述复合物流经检测线时，被检测线的单克隆抗体所捕获，形成胶体金偶联单克隆抗体—细菌—捕获抗体的三元复合物，使检测线出现可视化的颜色；随着继续层析，复合物被质控线上的羊抗鼠抗体捕获，质控线呈现可视化的颜色；

若样品不含目标细菌，当样品流经金标垫时，胶体金偶联的单克隆抗体随样品层析，最终到达质控线，被质控线的羊抗鼠抗体捕获，质控线呈现可视化的颜色，检测线不显示颜色。