[发明专利]对前列腺癌细胞特异性识别的新型多肽及其衍生物与应用

说明书

本发明公开了对前列腺癌细胞特异性识别的新型多肽及其衍生物与应用，所述多肽经噬菌体‑多肽文库筛选得到，能够特异性地结合肿瘤细胞，且结合效率高，可替代传统的单链抗体作为胞外识别区用于制备肿瘤抗原结合肽‑工程化免疫细胞中，所述制备方法能够针对抗原不明确的肿瘤，显著缩短筛选胞外识别区的时间，且筛选出的多肽配体与肿瘤细胞的结合效率更高，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体而言，涉及一种对前列腺癌细胞特异性识别的新型多肽及其衍生物与应用。

背景技术

目前，肿瘤已成为世界上继心血管疾病的第二大死因，肿瘤患者人数逐年增加，当前针对肿瘤的治疗方法主要包括手术治疗、放疗、化疗和靶向药物治疗等，这些传统的肿瘤治疗方法聚焦于肿瘤病灶局部，在物理和化学层面上杀灭肿瘤细胞，其中，常规的手术治疗主要采用手术切除的方式，但是手术切除难将肿瘤细胞切除干净，因此患者术后容易出现复发；放疗和化疗在杀死肿瘤细胞的同时也会杀死正常的人体细胞，对患者造成较大的伤害；靶向药物治疗虽然在一定程度上能够减轻药物的不良反应，但是易产生肿瘤耐药性，进而导致肿瘤复发。随着分子生物学和肿瘤生物学的不断发展，肿瘤免疫疗法应运而生，成为继手术治疗、放疗、化疗、靶向药物治疗后的另一种有效治疗方法，不同于传统的肿瘤治疗方法，肿瘤免疫疗法并非直接作用于病灶，而是通过增强人体免疫系统达到控制和杀灭肿瘤的目的，相较于传统的肿瘤治疗方法而言，肿瘤免疫疗法具有副作用小、特异性强、杀瘤谱广、低复发率等优点。

肿瘤免疫疗法分为两类：一类是免疫检查点抑制剂，另一类是细胞免疫疗法，在细胞免疫疗法中，嵌合抗原受体修饰T细胞(Chimeric antigen receptor modification Tcells，CAR-T)和嵌合抗原受体修饰NK细胞(Chimeric antigen receptor modificationNK cells，CAR-NK)免疫疗法是目前研究进展最迅速、应用前景较好的两种方法，其原理在于经嵌合抗原受体(Chimeric antigen receptor，CAR)修饰的T细胞或NK细胞，可以特异性地识别肿瘤细胞表面的肿瘤相关抗原，使效应T细胞或NK细胞的靶向性、杀伤活性和持久性均较常规应用的免疫细胞高，并可克服肿瘤局部免疫抑制微环境并打破宿主免疫耐受状态。CAR是CAR-T和CAR-NK的核心结构，赋予细胞特异性识别中肿瘤细胞表面肿瘤相关抗原的能力，CAR主要由三个功能结构域构成，分别是胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域，胞外结构域由负责识别并结合抗原的单克隆抗体的单链可变片段(Single-chain variablefragment，scFv)及一段起连接作用的铰链区(Hinge)构成；胞内结构域由共刺激信号结构域(Costimulatory domain)和信号转导结构域(Signaling domain)构成。

当前的CAR细胞疗法依赖于特异性的肿瘤相关抗原(Tumor associated antigen，TAA)明确的肿瘤类型，若所述肿瘤的肿瘤相关抗原不明确或未经鉴定，则无法基于肿瘤相关抗原制备相关特异性识别的单链抗体序列，进而也就无法构建能够有效地识别肿瘤细胞的特异性CAR，以及特异性识别并杀伤肿瘤细胞的CAR-T或CAR-NK细胞，此外，单链抗体来源于常规的单抗制备并测序获得，这种常规方法得到的抗体的制备周期长、抗体单链化后特异性结合效率普遍较低、无法针对于抗原不明确肿瘤。为了解决上述本领域存在的技术问题，本发明的目的在于提供一种噬菌体-多肽文库筛选TABP-EIC(Tumor Antigen BindingPeptide-Engineering Immune Cell，肿瘤抗原结合肽-工程化免疫细胞)胞外识别区序列的方法，该方法得到的多肽配体可替代传统的单链抗体用于制备TABP-EIC细胞，相对于传统的制备TABP-EIC细胞的方法而言，本发明所述制备方法能够针对抗原不明确的肿瘤，显著缩短筛选胞外识别区的时间，且筛选出的多肽配体与肿瘤细胞的结合效率更高。迄今为止，未见将本发明所述的新型多肽应用于免疫治疗中的相关报道。

发明内容