[发明专利]一种与湖羊睾丸性状相关的ADPGK基因分子标记及其应用

说明书

本发明公开了一种与湖羊睾丸性状相关的ADPGK基因分子标记及其应用，所述的分子标记由ADPGK基因序列（Gene Bank ID:101116836）通过设计的特异性引物扩增得到，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示，在序列表SEQ ID NO.1的第130bp处有一个C/T的碱基突变，该突变导致HpyCH4 Ⅲ‑RFLP酶切多态性。通过分析湖羊ADPGK基因分型与睾丸性状的关联，结果显示，湖羊个体的基因型分为CC基因型和TC基因型，且TC基因型个体睾丸重量、大小、附睾重以及精子数显著高于CC基因型个体。采用本发明的分子标记，提高了选种的准确性，可在湖羊公羊幼年时选择出精子产量较高的湖羊个体，使湖羊品种的早期选育成为可能，加速了育种进程。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种与湖羊睾丸性状相关的ADPGK基因分子标记及其应用。

背景技术

近年来，随着对羊肉需求量的不断增加，导致羊肉供不应求。因此，培育高繁殖力绵羊新品种或品系，是缓解我国羊肉紧张的主要措施之一，也是国家畜禽良种联合攻关的重要任务之一。绵羊人工授精技术是集约化羊场迅速扩大养殖规模、开展科学选种选配、提高养殖效益的最佳选择。所以，提高公羊的精子产量可以有效地提高羊群生产能力、改善目前肉羊生产供应不足的局面。在影响家畜生产效益的几大科技因素中，遗传育种与繁殖的科技贡献率占50%，但传统的表型选择育种方法准确性不高。有研究表明，湖羊睾丸大小与公羊精子发生能力显著相关，但睾丸大小这一睾丸性状需要湖羊公羊成年之后才可度量，增加了选择时间，导致选育进展缓慢。随着分子标记技术的发展，利用分子生物学方法对睾丸性状进行标记从而进行早期选育的辅助选择，减少育种过程中选择的盲目性，同时缩短选育时间，可极大提升育种效率。

湖羊作为太湖平原重要的家畜之一，是我国一级保护地方畜禽品种。为稀有白色羔皮羊品种，具有早熟、四季发情、一年二胎、每胎多羔、泌乳性能好、生长发育快、改良后有理想产肉性能、耐高温高湿等优良性状，可以作为分子标记辅助选育以缓解我国羊肉紧张局面的理想羊种。

ADP 依赖性葡萄糖激酶(ADP-dependent glucokinase，ADPGK)是一种在糖代谢途径中发挥作用的新型葡萄糖磷酸化酶。其是一种己糖激酶的同工酶，可以通过调节蛋白糖基化，从而调节体外和体内的细胞能量代谢。虽然它的功能与己糖激酶相似，但不同之处在于ADPGK采用ADP代替ATP作为磷酸供体且不受6-磷酸葡萄糖的抑制。有研究表明，在精子发生过程中，支持细胞通过大量糖酵解为生精细胞提供产生乳酸的能量 (Oliveira P F等，2015)，且精子在附睾中成熟的过程同样依赖糖酵解所产生的能量 (Hermo L等，2019)，除此之外，糖酵解是精子活动过程中的主要能量来源，并且参与精子获能 (Losano J 等，2017)。然而，目前关于ADPGK的应用主要集中于肿瘤细胞中，针对湖羊乃至绵羊繁殖力的相关研究尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种与湖羊睾丸性状相关的ADPGK基因分子标记，为湖羊睾丸性状检测提供一种辅助选择的分子标记，提高选种的准确性，使湖羊品种的早期选育成为可能，加速育种进程。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明提供的一种与湖羊睾丸性状相关的ADPGK基因分子标记，由ADPGK的DNA序列通过设计的特异性引物扩增得到，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，在序列SEQ IDNO.1的130bp处y表示有一个C/T的碱基突变，该突变导致RFLP- HpyCH4 Ⅲ多态性。

扩增上述分子标记的引物对如下：

正向引物F：ACCTGAAAAGGGTTGGAGAAT；