[发明专利]金纳米簇的制备方法及其在胆红素和锌离子联级检测中的应用

说明书

本发明公开了金纳米簇的制备方法，将牛血清白蛋白与HAuCl₄·3H₂O加水混合，加入组氨酸，调节混合液PH，在水浴下反应5～8h，得到浅黄色溶液，透析，冻干，即得。本发明还公开了上述金纳米簇在胆红素和锌离子联级检测中的应用。金纳米簇对fBR和Zn²⁺的响应迅速且灵敏，该方法适用于级联检测胆红素和Zn²⁺。

技术领域

本发明涉及胆红素的检测方法，具体涉及金纳米簇的制备方法及其在胆红素和锌离子联级检测中的应用。

背景技术

作为血红素分解代谢的终产物，胆红素具有重要临床意义。肝功能不全可能导致血液中高水平的胆红素。过多的胆红素具有神经毒性。但是，对动脉粥样硬化、冠状动脉疾病和糖尿病并发症的病人，血清胆红素水平偏低。从这个意义上讲，胆红素还可被视为评估心血管疾病风险的生物标志物。荧光分析可以提供许多信息，具有易于实施、操作简便、灵敏度高和选择性好的优点，因此它是测定胆红素的有力技术。如《基于金纳米簇的胆红素荧光检测方法》(兰万、肖文香等，桂林电子科技大学学报，第37卷第3期、2017年6月)公开了，以牛血清白蛋白为模板在生理条件下制备金纳米簇，牛血清白蛋白起到稳定剂和还原剂的作用，将氯金酸的金离子还原，形成温度的金纳米簇。由于牛血清白蛋白能与游离胆红素形成复合物，当牛血清白蛋白保护的金纳米簇与胆红素作用时，胆红素会使金纳米簇的荧光发生猝灭现象，基于此可以实现对血清中胆红素的高灵敏度和高选择性检测。

锌是人体必需的微量元素，参与许多细胞过程、细胞增殖、生长与发育。锌缺乏会导致身体发育迟缓和神经系统疾病。过量的Zn²⁺会降低免疫力和疾病抵抗力。金纳米簇(AuNCs)已被用于对Hg(II)和Cu(II)的测定。但是将AuNCs用于检测锌离子的文献报道并不多见。市面上并未出现基于金纳米簇荧光猝灭及恢复实现对胆红素和锌离子的级联检测。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种金纳米簇的制备方法及其在胆红素和锌离子联级检测中的应用。

本发明提供的技术方案是金纳米簇的制备方法，包括以下步骤：

1)将牛血清白蛋白与HAuCl₄·3H₂O混合，加水搅拌，然后加入组氨酸，得到混合液；调节混合液PH至5～6，在水浴35～40℃下反应5～8h，得到浅黄色溶液；

2)将浅黄色溶液透析，冻干，得到具有蓝色荧光的金纳米簇。

步骤1)中，牛血清白蛋白在混合液中的浓度为25～30mg/mL；HAuCl₄·3H₂O在混合液中的浓度为5～8mmol/L；组氨酸在混合液中的浓度为0.1～0.2mmol/L。

作为优选，水浴温度为37℃，水浴时间为6h。

作为优选，采用0.01mol/L的氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液调节PH。

本发明还提供了上述金纳米簇在胆红素和锌离子联级检测中的应用。

上述应用方法，具体包括以下步骤：

胆红素的检测：将金纳米簇用50mmol/L的PBS缓冲液稀释至浓度为0.5mg/ml，得到金纳米簇溶液；往金纳米簇溶液中缓慢滴加胆红素溶液，以372nm波长的光照激发，测定440nm波长处的荧光强度，绘制胆红素标准曲线或计算回归方程，用于定量检测胆红素的浓度；

锌离子的检测：将金纳米簇用PBS缓冲液稀释至浓度为0.5mg/ml，得到金纳米簇溶液；往金纳米簇溶液中缓慢滴加胆红素溶液直至荧光猝灭；然后逐步添加锌离子溶液，同样以372nm波长的光激发，测定440nm波长处的荧光强度，绘制锌离子溶液标准曲线或计算回归方程，用于定量检测锌离子浓度。