[发明专利]共轭聚合物纳米粒子复合荧光探针及其制备方法和应用

说明书

本发明属于荧光探针技术领域，具体涉及一种共轭聚合物纳米粒子复合荧光探针及其制备方法和应用。具有较宽紫外吸收的FeOOH材料，可以通过FRET作用使CPNsPBOC‑COOH产生荧光猝灭。在BChE和乙酰胆碱酯酶(ATCh)存在下，两者产生的酶解产物(一种硫代胆碱)能有效地降解FeOOH，使CPNsPBOC‑COOH的荧光恢复。经试验证明，CPNsPBOC‑COOH@FeOOH体系具有理想地荧光猝灭效率。FeOOH的大表面积和薄层结构为硫代胆碱的反应提供了丰富的接触面积，最终会提高探针的灵敏度和选择性，检测范围较宽，为0.02～2.6μg/mL，LOD较低，为3.5ng/mL。

技术领域

本发明属于荧光探针技术领域，具体涉及一种共轭聚合物纳米粒子复合荧光探针及其制备方法和应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

丁酰胆碱酶(BChE)又拟称胆碱酯酶、假性胆碱酯酶和血清胆碱酯酶，是由肝脏合成的一种非特异性酯酶，能水解许多胆碱类生物分子。BChE是由肝脏细胞合成分泌进入血液，主要分布在肝脏、血清和淋巴液中，在血浆中的含量更高。BChE水解丁酰胆碱生成胆碱及乙酸，胆碱可以与巯基显色剂反应生成TNB黄色化合物，根据颜色深浅进行比色定量，水解产物胆碱的数量可以反应胆碱酶的活力。与其姊妹酶乙酰胆碱酶(AChE)相比，可以通过测定血清中BChE的活性可以实现对肝细胞癌、有机磷中毒、帕金森氏症和阿尔茨海默氏症等多种疾病的诊断。因此，准确地检测BChE的含量对临床诊断具有重要意义。

然而，与各种测定AChE活性的方法相比，用于BChE活性测定的方法很少。目前，最常用和最普遍应用的方法是Ellman比色法，由于其方便易用的高通量分析。然而，其结果通常会受到血清样品含有的生物分子的干扰和试剂的不稳定性的影响，极大地限制了其实际应用。因此，建立具有一种性能稳定的和高抗干扰性能的新方法是非常具有前景和应用价值的。近年来，基于荧光技术的高灵敏度、高稳定性和高选择性，被认为是一种很有前途的方法。迄今为止，各种材料都被用作有效的淬灭剂，包括氧化石墨烯金属纳米粒子和过渡金属硫族化合物。过渡金属羟基氧化物(MOOH)作为一种二维纳米材料，具有优异的光吸收性能、高比表面积和良好的环境相容性，受到了广泛的关注。过渡金属羟基氧化物纳米材料(MOOH)具有氧化能力，可以通过还原物种转化为M²⁺。当MOOH遇到还原性物种时，纳米材料被分解，从而恢复探针的荧光。这些特性使MOOH纳米材料成为一种很有前途的荧光基团纳米猝灭剂。

但是发明人研究发现，现在过渡金属羟基氧化物检测限较大，检测灵敏度低，同时需要其他贵金属催化剂辅助使用，造价高。此外过渡金属羟基氧化物制成的荧光探针稳定性较差。

发明内容

基于上述现有技术的不足，本发明提供一种共轭聚合物纳米粒子复合荧光探针及其制备方法和应用，具有较宽紫外吸收的FeOOH材料，可以通过FRET作用使CPNsPBOC-COOH产生荧光猝灭。在BChE和乙酰胆碱酯酶(ATCh)存在下，两者产生的酶解产物(一种硫代胆碱)能有效地降解FeOOH，使CPNsPBOC-COOH的荧光恢复。经试验证明，CPNsPBOC-COOH@FeOOH体系具有理想地荧光猝灭效率。FeOOH的大表面积和薄层结构为硫代胆碱的反应提供了丰富的接触面积，最终会提高探针的灵敏度和选择性，检测范围较宽，为0.02～2.6μg/mL，LOD较低，为3.5ng/mL。

具体地，本发明是通过如下所述的技术方案实现的：

本发明第一方面，提供一种轭聚合物纳米粒子复合荧光探针，包括羧基化的共轭聚合物纳米粒子CPNs_PBOC-COOH和过渡金属羟基氧化物。

本发明第二方面，提供一种共轭聚合物纳米粒子复合荧光探针的制备方法，将CPNs_PBOC-COOH与过渡金属羟基氧化物在室温下混合，避光反应，即得。