[发明专利]芦荟多糖用于制备家畜冷冻保存剂的应用

说明书

本发明公开了芦荟多糖用于制备家畜精液冷冻保存剂的应用。本发明所公开的方案是将芦荟多糖用于制备家畜精液冷冻保护剂，用于猪、羊和牛细管冷冻精液长期保存、人工授精及精液超低温冷冻后的长途运输后输精，可显著提高冷冻‑解冻后猪、羊和牛精子活率、顶体完整率和质膜完整率。

技术领域

本发明属于哺乳动物精液的超低温冷冻保存技术领域，具体涉及芦荟多糖作为抗冻保护剂在家畜精液冷冻保中的应用。

背景技术

精子冷冻技术是人工授精的重要革新，不仅解决了雄性动物精液的长期保存问题，便于保存遗传资源，而且应用方便，不受时间及空间的限制，在开展省际、国际之间畜牧业的协作，在建立全球优良物种基因库等方面起到重要作用。精子冷冻技术的广泛应用，有利于扩大优秀种公畜的利用率，减少公畜的饲养量，减少经济成本，提高了畜牧业效益，尤其在人工授精领域方面起到重要的作用。精液冷冻技术对我国及国际的畜牧业可持续发展和畜产品的满足供应具有重要现实意义。

精子冷冻保存，需要经过一系列的程序降温处理，最终将精子置于液氮(-198℃)中，由于精子对温度变化比较敏感，在冷冻降温的过程中，精子容易遭受冷冻损伤，主要包括物理性损伤、化学性损伤和氧化性损伤。跟新鲜精液相比，冷冻-解冻后的精子，其活率、顶体完整率、线粒体活性、DNA完整率和膜完整率显著下降。而精子质量的好坏，与妊娠率、分娩率和窝产仔数密切相关。目前为止，冷冻精液人工授精技术已经应用于养牛生产，在奶牛繁殖和改良方面应用最为普及。但冷冻解冻后，依然有40％-50％精子失去活性，严重降低了良种公牛的利用率。而猪精子和羊精子对于冷冻刺激更为敏感，解冻后精子复苏率低，异常精子多，受胎率低于正常受胎率，故猪精子和羊精子冷冻还处于试验阶段。

发明内容

针对目前家畜精液冷冻的缺陷或不足之处，本发明提供了芦荟多糖用于制备家畜精液冷冻保存剂的应用，所述家畜为猪、牛或羊。

进一步，本发明还提供了一种家畜精液冷冻保护剂。所述家畜精液冷冻保护剂包括冷冻基础液、蛋黄和芦荟多糖；100mL家畜精液冷冻保护剂中芦荟多糖添加量为2mg-60mg，100mL家畜精液冷冻保护剂中蛋黄添加量为15mL-25mL；所述冷冻基础液的配方为：葡萄糖1.1g，柠檬酸1.48g，Tris2.42g，青霉素钠0.06g，硫酸链霉素0.1g，双蒸水100mL。

本发明的另一种家畜精液冷冻保护剂包括冷冻基础液、蛋黄、芦荟多糖和甘油；100mL家畜精液冷冻保护剂中芦荟多糖添加量为2mg-60mg，100mL家畜精液冷冻保护剂中蛋黄添加量为15mL-25mL，100mL家畜精液冷冻保护剂中甘油的添加量为6mL-12mL；所述冷冻基础液的配方为：葡萄糖1.1g，柠檬酸1.48g，Tris2.42g，青霉素钠0.06g，硫酸链霉素0.1g，双蒸水100mL。

本发明还提供了上述家畜精液冷冻保护剂的制备方法。所提供方法包括：

1)取配方量的葡萄糖、柠檬酸、Tris、青霉素钠、硫酸链霉素、溶于双蒸水中，定容，调节pH至6-6.5，渗透压280-290mosm/L，配制成冷冻基础液；

2)将步骤1)得到的冷冻基础液与配方量蛋黄和芦荟多糖混匀后配制成Ⅰ液；

3)向步骤2)所配制的Ⅰ液，加入配方量甘油混匀，pH值调整至6.0～7.5，渗透压调至280-290mosm/L，灭菌后制成Ⅱ液。

具体的，100mL家畜精液冷冻保护剂或Ⅰ液中芦荟多糖添加量为4mg-40mg、2mg-35mg或6mg-60mg。

本发明的有益效果是：

本发明首次将芦荟多糖作为冷冻抗冻剂用于家畜精液冷冻保存，制备方法简单，取材容易，效果可靠，易于推广，适用于家畜细管冷冻精液人工授精及精液超低温冷冻后的长期保存和长途运输后输精，可显著提高冷冻-解冻后精子活率、顶体完整率和质膜完整率，保持精子的受精活力。

具体实施方式