[发明专利]用于检测人血中AEP蛋白水平的化学发光免疫检测试剂盒

权利要求书

1.一种AEP酶促化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括：酶标液、AEP标准品、包被抗AEP单克隆抗体的免疫磁珠、稀释液、化学发光底物和浓缩洗涤液；

所述的包被抗AEP单克隆抗体的免疫磁珠，即含有标记有抗AEP单克隆抗体的磁珠，其具体通过将磁珠经活化剂活化后，与超滤后的抗AEP单克隆抗体在MEM溶液中偶联，后通过终洗液清洗后得到。

2.根据权利要求1所述的AEP酶促化学发光免疫检测试剂盒，其特征是，所述的酶标液中含有辣根过氧化物酶标记的AEP单克隆抗体，该AEP单克隆抗体为兔抗或鼠抗，靶点为D6S4H。

3.根据权利要求1所述的AEP酶促化学发光免疫检测试剂盒，其特征是，所述的AEP标准品，其溶液浓度采用：0.01μg/mL、0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL。

4.根据权利要求1所述的AEP酶促化学发光免疫检测试剂盒，其特征是，所述的化学发光底物液包括：辣根过氧化物酶底物溶液A液与B液，即发光增强剂和发光底物为HRP酶的底物。

5.根据权利要求1所述的AEP酶促化学发光免疫检测试剂盒，其特征是，所述的稀释液为含0.3-0.5M NaCl的50mM的磷酸盐缓冲液。

6.根据权利要求1所述的AEP酶促化学发光免疫检测试剂盒，其特征是，所述的浓缩洗涤液为20倍浓缩液，是pH值为7-8，含有终浓度为0.01-0.1％Proclin300，0.5-1.5％吐温-20和0.01-0.05mol/L的磷酸盐缓冲液，使用时用去离子水稀释至1倍洗涤液。

7.根据权利要求1～6中任一所述的AEP酶促化学发光免疫检测试剂盒，其特征是，每升包含酶标液20mL、包被抗AEP单克隆抗体的免疫磁珠5mL、AEP标准品1.5mL、稀释液100mL、化学发光底物A液50mL、化学发光底物B液50mL、浓缩洗涤液20mL，余量为水。

8.一种基于上述权利要求1～7中任一所述的AEP酶促化学发光免疫检测试剂盒的应用，其特征在于，用于检测人血中AEP蛋白水平，即通过将抗AEP单克隆抗体包被在磁珠表面，与样品中的AEP结合后，再与酶标AEP单克隆抗体试剂结合，形成固相-抗体-AEP抗原-酶标抗体夹心免疫复合物，通过加入发光底物后检测发光强度，对应标准曲线得到AEP含量。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征是，具体为：在样品中加入定量的包被抗AEP单克隆抗体的免疫磁珠和HRP标记抗AEP单克隆抗体；37℃孵育后，包被抗AEP单克隆抗体的免疫磁珠与HRP标记抗AEP单克隆抗体分别与标本中AEP分子的不同表位结合，形成磁珠-抗体-抗原-抗体复合物；在外加磁场中直接沉淀，即可分离；弃去上清液，清洗沉淀的复合物，然后加入促化学发光底物HRP；底物在酶的作用下催化裂解，形成不稳定的激发态中间体，当激发态中间体回到基态时便发出了光子，形成发光反应，即可使用发光仪检测反应的发光强度，根据标准曲线即可算出样品中AEP含量。

10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征是，检测时血浆样品应添加在肝素抗凝管中。