[发明专利]检测非洲猪瘟病毒衣壳完整性的PCR引物、探针、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.检测非洲猪瘟病毒衣壳完整性的PCR引物和探针，其特征在于：所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.根据权利要求1所述的检测非洲猪瘟病毒衣壳完整性的PCR引物和探针，其特征在于：所述的探针3’还含有荧光淬灭剂BHQ1。

3.权利要求1或2所述的检测非洲猪瘟病毒衣壳完整性的PCR引物和探针在制备检测非洲猪瘟病毒的试剂盒中的应用。

4.包含权利要求1或2所述的检测非洲猪瘟病毒衣壳完整性的PCR引物和探针的试剂盒。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：a、核苷酸序列如SEQID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的探针；b、与核酸结合并具有光敏特性的核酸染料。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述的核酸染料为叠氮溴化丙锭。

7.根据权利要求4-6任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的具体组成为：PMA，2×Pro TaqHS Probe Premix，探针，上游引物，下游引物，模板和无菌水。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的具体组成为：PMA 200μL，2×Pro TaqHS Probe Premix 12.5μL，10pmol/μL的探针1μL，10pmol/μL的上游引物1.2μL，10pmol/μL的下游引物1.2μL，模板2μL，无菌水7.1μL。

9.权利要求4-8任一项所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、取待测样品，均分为2份，一份进行PMA处理，一份采用无菌水处理；

b、分别提取2份样品的DNA；

c、对步骤b提取的DNA进行qPCR检测；

d、qPCR反应结束后，根据两份核酸样本荧光定量PCR反应的扩增曲线和循环阈值，快速检测样本中非洲猪瘟病毒衣壳完整性。

10.根据权利要求9所述的试剂盒的使用方法，其特征在于：所述qPCR检测的反应条件为：95℃ 3min，再95℃ 15s，55℃ 30s，后两步进行40个循环，在退火阶段进行荧光信号检测。