[发明专利]一种免灭菌条件的苹果组培抑菌剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种免灭菌条件的苹果组培抑菌剂及其制备方法，涉及组培技术领域，通过在还原铁粉的催化还原下，使得对氯硝基苯中的硝基形成氨基，生成中间体1，之后中间体1与三乙胺发生季铵化反应，生成带有季铵基团的中间体2，之后中间体2与四氯乙烯亲核取代反应，合成中间体3，中间体3具有碳碳双键以及大量季铵基团，经过聚合后，形成高分子的抑菌剂；通过将该抑菌剂添加到苹果组培用的培养基中，达到无菌条件，无需高压灭菌，可以直接利用塑料杯代替组培瓶，简化组培环节，降低组培成本，同时，无菌条件温和，避免了培养基中的激素和营养元素的流失，保证了组培苗的营养吸收，使得组培苗生长健壮，分化率高。

技术领域

本发明涉及组培技术领域，具体涉及一种免灭菌条件的苹果组培抑菌剂及其制备方法。

背景技术

植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术，植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在无菌条件下接种在含有各种营养物质及植物激素的培养基上进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术；

而苹果的组织培养是采用无菌培养技术，将来自优良植物的茎尖、腋芽、叶片等器官以及其组织切片进行离体培养，使之在短期内获得大量遗传性一致的个体的办法，但现有技术中实现无菌培养技术是通过高压灭菌，此方法虽然灭菌效果较好但是需要大量组培瓶，而且高压灭菌时培养基中的激素和营养元素流失严重，导致组培成本大；

因此，亟需一种免灭菌条件的苹果组培抑菌剂来解决以上问题是本发明的关键。

发明内容

为了克服上述的技术问题，本发明的目的在于提供一种免灭菌条件的苹果组培抑菌剂及其制备方法：通过在还原铁粉的催化还原下，使得对氯硝基苯中的硝基形成氨基，生成中间体1，之后中间体1与三乙胺发生季铵化反应，生成带有季铵基团的中间体2，之后中间体2与四氯乙烯亲核取代反应，合成中间体3，中间体3具有碳碳双键以及大量季铵基团，中间体3经过聚合后，相对分子量增大，电荷密度提高，因此抗菌性能大幅度提高，从而形成高分子的抑菌剂，解决了现有技术中实现无菌培养技术是通过高压灭菌，此方法虽然灭菌效果较好但是需要大量组培瓶，而且高压灭菌时培养基中的激素和营养元素流失严重，导致组培成本大的问题。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种免灭菌条件的苹果组培抑菌剂，结构如下：

该种免灭菌条件的苹果组培抑菌剂的制备方法，包括以下步骤：

步骤一：将还原铁粉、冰醋酸、去离子水加入至安装有冷凝回流管的三口烧瓶中，加热至沸腾并维持3-5min，之后将对氯硝基苯加入至三口烧瓶中，加热回流0.5-2h，反应完全，冰水浴冷却，加入氯化钠，析出晶体，真空抽滤，收集滤饼，将滤饼放置于真空干燥箱中，在温度为60-80℃的条件下烘干至恒重，得到中间体1；

反应原理如下：

步骤二：将无水乙醇、三乙胺以及中间体1加入至安装有冷凝回流管以及搅拌器的三口烧瓶中，在温度为70-80℃，搅拌速率为100-300r/min的条件下搅拌反应8-10h，之后将反应产物在60℃的条件下减压蒸馏去除溶剂，将蒸馏产物用乙酸乙酯以及丙酮分别洗涤2-3次，真空抽滤，将滤饼放置于真空干燥箱中，在温度为40-50℃的条件下烘干至恒重，得到中间体2；

反应原理如下：