[发明专利]一种高通量快速磁珠法提取鸡血基因组DNA的试剂盒及提取法

说明书

本发明公开了一种高通量快速磁珠法提取鸡血基因组DNA的试剂盒及提取法。本发明所要保护的一个技术方案是提取DNA的组合物。所述组合物含有细胞悬浮液、裂解液、磁珠悬浮液和结合液。所述组合物中各溶液的配比可为细胞悬浮液300‑500μL，裂解液300‑500μL，磁珠悬浮液5‑20μL，结合液600‑800μL。实验证明，和现有的磁珠分离纯化基因组DNA试剂盒相比，本试剂盒提取DNA得率显著提高(p0.01)。而本试剂盒配套一板96孔试剂盒，每次操作可完成96个样品，经测试每人可同时操作4‑8套96孔板，即相同时间内每人可操作400‑800个样品，效率得到飞跃式提高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种高通量快速磁珠法提取鸡血基因组DNA的试剂盒及提取法。

背景技术

核酸的分子生物学检测技术是现代医学、动物生物学发展基础和常规应用的最为重要的手段之一。提取、纯化的基因组DNA可直接用于后续的PCR检测、宏基因组检测、二代测序文库制备等工作。从目前技术发展的程度来看，在实验室获得高质量、高完整度、高纯度的鸡血基因组DNA仍然是一个不简单易行，耗时耗力过程。鸡生长过程中随时要检测是否感染鸡瘟等流行性疾病，传统方法消耗大量的人力和时间，往往难以在需要的时间内完成。开发新的简单、高效、快速的鸡血基因组DNA提取方法，获得高质量样品，具有非常重要的应用价值。

传统的核酸分离方法主要包含细胞破碎、细胞核破碎、DNA萃取、沉淀，高速离心等过程，用SDS进行蛋白变性或蛋白酶K来消化提取组分中的核酸酶和其他蛋白组分，再用乙醇去除盐分，洗涤后可得到核酸DNA。膜吸附的方法也可用来做基因组DNA的提取和纯化，但是膜吸附纯化方法高度依赖离心机，每个样品在每个步骤都使用移液器，步骤繁杂、费时长、回收率低。

磁珠纯化技术是近些年来发展起来的新方法，特点是简单有效，主要原理是在具有超顺磁性的Fe磁核上均匀包被二氧化硅，二氧化硅连接能特异性吸附阴性电荷核酸的能力。磁珠法和传统方法相比，整个过程无需剧毒试剂参与，且避免多步骤高转速离心，步骤较少、且简单易行。但是现有的磁珠分离法存在得率不高或效率不高的问题，且大部分适用于单通道或8通道，无法实现真正意义上的高通量DNA提取；或者是全自动电动化的96通道，为进口大型仪器，不利于普及型应用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何高效和/或快速提取动物基因组DNA。

为了解决上述技术问题，本发明首先提供了提取DNA的组合物。所述组合物含有细胞悬浮液、裂解液、磁珠悬浮液和结合液。所述组合物中各溶液的配比可为细胞悬浮液300-500μL，裂解液300-500μL，磁珠悬浮液5-20μL，结合液600-800μL。

所述细胞悬浮液可为Tris-HCl缓冲溶液；

所述裂解液的溶质可为十二烷基硫酸钠(SDS)、NP-40和蛋白酶K，溶剂可为所述Tris-HCl缓冲溶。所述溶质和溶剂的配比可为NP-40 5g，蛋白酶K 100ng，Tris-HCl缓冲溶液100mL。

所述磁珠悬浮液可为直径80-1000nm的Fe-Si磁珠与水的混合液。所述磁珠的浓度可为10-20mg/mL。

所述结合液的溶剂可为100％异丙醇。所述结合液的溶质为异硫氝酸呱。所述溶质与溶剂的配可为286g：1000mL。上文所述组合物可为从动物组织中提取DNA的组合物。上述组合物可为从鸡血中提取DNA的组合物。

所述Tris-HCl缓冲溶液的浓度为10mmol/L、pH为8.5。

所述裂解液的pH可为8.5。上文所述裂解液的溶质还可包括叠氮化钠和氯化钠。所述裂解液的溶质的配比可为NP-40 5g，蛋白酶K 100ng，Tris-HCL缓冲溶液100mL，叠氮化钠1g，氯化钠11.58g。

上文所述组合物还可包括漂洗液和洗脱液。