[发明专利]一种卵母细胞体外成熟培养液及其应用

说明书

本发明公开了一种添加有趋化因子配体14(CXCL14)的猪卵母细胞体外成熟培养液，该培养液能提高卵母细胞体外成熟的质量。卵母细胞的质量与孤雌激活技术、体外受精技术、体细胞克隆技术紧密相关，提高体外成熟卵母细胞的质量对畜牧生产、医学生殖、生命科学研究等领域都有极其重要的作用。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，特别涉及一种卵母细胞体外成熟培养液及其应用。

背景技术

体外成熟的卵母细胞可用于制备克隆胚胎、体外受精胚胎、孤雌激活胚胎等，这些胚胎的制备和许多科学研究是紧密相关的，在畜牧生产、医学生殖、生命科学研究等领域有重要用途。但是在实际制备中，由于获取成本、技术等问题，体外成熟卵母细胞不能大量制备且质量差，使得体细胞核移植等技术在科研、生产各个领域并不能广泛应用。体细胞核移植技术，是将供体细胞移入去核的体外成熟卵母细胞中，使得核供体的遗传信息得到完全复制，利用该技术能够在畜牧生产上迅速大量获取各种优秀性状的畜禽动物后代。因此提高体外成熟卵母细胞的质量，有巨大的生产价值。而且，结合基因编辑技术，特别是CRISPR-Cas9技术，能够制备人类疾病动物模型和作为生物反应器生产具有医疗应用价值的药物。此外，在生命科学研究中，利用成熟卵母细胞制备的各种胚胎是重要的实验研究材料，可以帮助我们理解生命发生的各种机制，这有着巨大的意义。综上，卵母细胞体外培养技术的改善和优化，对于各种领域都是十分重要的。

由于卵母细胞体内成熟过程中，受到体内内环境及众多因素的影响，目前影响卵母细胞成熟的核心因子尚未可知。因而卵母细胞在体外成熟培养中，由于缺乏一些未知的必要成分，体外成熟的卵母细胞质量远低于体内正常成熟的卵母细胞，这限制了体细胞核移植胚胎、体外受精胚胎、孤雌胚胎的高效生产应用。目前普遍认为体外成熟的卵母细胞质量差的主要原因是体外成熟过程缺乏清除自由基的物质和一些成熟所必须的因子所导致。

CXCL14是一种在许多组织都有表达的细胞因子，可增强细胞的迁移能力和增殖能力，被证明有调节钙内流，激活卵丘细胞AP-1的作用等。

发明内容

本发明的目的在于提供一种卵母细胞体外成熟培养液及其在卵母细胞体外成熟、体细胞克隆、孤雌胚胎、体外受精胚胎制备等领域的应用。

本发明的一个方面，提供了一种卵母细胞体外成熟培养液，该培养液中添加有CXCL14细胞因子。添加了CXCL14细胞因子的卵母细胞体外成熟培养液可以提高卵母细胞体外成熟的质量，获得高质量的体外成熟卵母细胞，为后续研究提供基础支持。

在某些实施方式中，该卵母细胞体外成熟培养液的组分为：以TCM-199基础培养液为基础，补充添加0.6mM半胱氨酸，0.1IU/mL人绒毛膜促性腺激素、0.1IU/mL孕马血清促性腺激素、10％胎牛血清、10％猪卵泡液及CXCL14细胞因子。

在某些实施方式中，该卵母细胞体外成熟培养液的组分为：以TCM-199基础培养液为基础，补充添加0.6mM半胱氨酸，0.1IU/mL人绒毛膜促性腺激素、0.1IU/mL孕马血清促性腺激素、10％胎牛血清、10％猪卵泡液及5-250ng/mL CXCL14细胞因子。

在某些实施方式中，该卵母细胞体外成熟培养液的组分为：以TCM-199基础培养液为基础，补充添加0.6mM半胱氨酸，0.1IU/mL人绒毛膜促性腺激素、0.1IU/mL孕马血清促性腺激素、10％胎牛血清、10％猪卵泡液及250ng/mL CXCL14细胞因子。

在某些实施方式中，该卵母细胞体外成熟培养液的组分为：以TCM-199基础培养液为基础，补充添加0.6mM半胱氨酸，0.1IU/mL人绒毛膜促性腺激素、0.1IU/mL孕马血清促性腺激素、10％胎牛血清、10％猪卵泡液及125ng/mL CXCL14细胞因子。

本发明的另一个方面，提供了所述卵母细胞体外成熟培养液在卵母细胞体外成熟培养中的应用。

本发明的第三个方面，提供了所述卵母细胞体外成熟培养液在孤雌胚胎技术领域的应用。