[发明专利]一种狄氏副拟杆菌胞外多糖及其提取方法与应用

说明书

本发明属于细胞多糖技术领域，公开了一种狄氏副拟杆菌胞外多糖及其提取方法与应用。所述狄氏副拟杆菌胞外多糖为同多糖，其单糖组成为甘露糖，其主链由→2)‑D‑Man‑(1→，→3)‑D‑Man‑(1→和→6)‑D‑Man‑(1→组成，支链由→2，4)‑D‑Man‑(1→和D‑Man‑(1→组成。所述狄氏副拟杆菌胞外多糖是从狄氏副拟杆菌中分离得到的新多糖，可起到增强免疫力的作用，如通过促进吞噬细胞的生长、炎症因子的产生和活性氧、一氧化氮的生成释放，起到免疫增强的效果。

技术领域

本发明属于细胞多糖技术领域，尤其涉及一种狄氏副拟杆菌胞外多糖及其提取方法与应用。

背景技术

免疫系统是机体抵御外界病原体的第一道防线，对于维持机体的生理平衡具有重要的作用。但过强或过低的免疫力都可引起多种不良的免疫反应。免疫缺陷是免疫功能低下的最常见表现，是导致感染、肿瘤的主要因素之一。目前，治疗免疫缺陷最常见的方法是使用免疫增强剂，如多糖、胸腺肽、干扰素和卡介苗等，在这些药物中，多糖作为免疫增强剂已被证明是安全无毒的，具备良好的研究和应用前景。

微生物胞外多糖是指微生物在生长代谢过程中分泌到细胞外的多糖，主要指粘液多糖。由于微生物胞外多糖具有免疫调节、抗炎、抗癌、抗氧化等多种生物活性等优点，且微生物胞外多糖的生产受地理、气候等因素的影响较小，生产周期短，产量及质量稳定。近些年来，对于微生物胞外多糖的研究和开发愈发受到人们的青睐。

狄氏副拟杆菌(Parabacteroides distasonis，简称Pd菌)，属于拟杆菌门，是一种严格厌氧的革兰氏阴性菌。近些年来的一些研究表明，Pd菌在改善胰岛素抵抗、治疗二型糖尿病、抑制结肠癌增殖等方面具有良好的作用。虽然Pd菌拥有众多的有益效果，但作为活体微生物，机体直接摄入Pd菌可能会引起诸如菌血症等严重的感染。

因此，希望对狄氏副拟杆菌所产生的胞外多糖展开研究，以期开发和制备得到具备良好功效活性的狄氏副拟杆菌胞外多糖。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种狄氏副拟杆菌胞外多糖及其提取方法与应用，所述狄氏副拟杆菌胞外多糖是从狄氏副拟杆菌中分离得到的新多糖，可起到增强免疫力的作用，如通过促进吞噬细胞的生长、炎症因子的产生和活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)的生成释放，起到免疫增强的效果。

本发明提供了一种狄氏副拟杆菌胞外多糖，所述狄氏副拟杆菌胞外多糖为同多糖，其单糖组成为甘露糖(Man)，其主链由→2)-D-Man-(1→，→3)-D-Man-(1→和→6)-D-Man-(1→组成，支链由→2，4)-D-Man-(1→和D-Man-(1→组成。

上述各组分甘露糖的摩尔比依次为3.03：1：1.2：1.27：6.37；所述狄氏副拟杆菌胞外多糖的总糖含量为102.90％，重均分子量为3396.78kDa。

本发明还提供了上述狄氏副拟杆菌胞外多糖的提取方法，包括以下步骤：

(1)对狄氏副拟杆菌进行培养，得到发酵液；

(2)将所述发酵液去除菌体后取上清液，经乙醇沉淀，蛋白酶酶解，Sevag试剂除蛋白，透析，脱色，得到粗多糖；

(3)所述粗多糖依次经阴离子交换柱和凝胶柱进行洗脱，透析，得到狄氏副拟杆菌胞外多糖。

优选的，步骤(1)中对狄氏副拟杆菌进行所述培养的方法为：将狄氏副拟杆菌接种于脑心浸出液液体培养基中进行厌氧培养。

优选的，步骤(2)所述去除菌体的方法为离心处理。

优选的，步骤(2)中所述蛋白酶为木瓜蛋白酶。

所述Sevag试剂为三氯甲烷与正丁醇体积比为4：1混合的混合物。