[发明专利]肺炎链球菌无动物源冻干保护剂

说明书

本发明公开了一种肺炎链球菌无动物源冻干保护剂，属于微生物保存领域。所述冻干保护剂由如下成分组成：1％～5％重量/体积的大豆胨，1％～5％重量/体积的海藻糖，4％～8％重量/体积的甘露醇和0.3％～1.5％体积/体积的甘油，余量为水。该冻干保护剂可较好维持肺炎链球菌活性，效果与脱脂牛奶保护剂或市售无动物源冻干保护剂相当，但不含动物源成分且成本低。

技术领域

本发明属于微生物保存领域。

背景技术

冷冻干燥就是将含水的物质预先降温冻结成固体，然后在低温减压条件下利用水的升华性能，使物质低温脱水而达到干燥目的的一种干燥方法。冷冻干燥能较大程度保留菌的活性，活菌制品在储运前通常需要进行冷冻干燥处理。但是，冷冻干燥过程产生多种应力会造成部分微生物细胞一定的损伤，甚至死亡，需要加入冻干保护剂来尽可能维持微生物的活性。

冻干保护剂主要可分为复合物、糖类、无机盐类、醇类、氨基酸类、聚合物、表面活性剂和抗氧化剂等几种类别，每种类别下又包含多种具体物质，例如，前述复合物包括脱脂乳、血清、蛋白胨、明胶、多肽、糊精、甲基化纤维素等等，糖类包括蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖等等(张光磊，活菌制剂冻干保护剂的研究进展，微生物学免疫学进展，2015年8月第43卷第4期)。

肺炎链球菌是一种革兰阳性菌，可引起肺炎、脑膜炎和菌血症等多种疾病。肺炎链球菌的保存关系着肺炎链球菌疫苗的原料品质，因此，肺炎链球菌在相关疫苗生产中十分重要。

公布号为CN 111849781 A的专利申请文件公开了一种肺炎链球菌冻干保护剂，其包括浓度10％wt脱脂奶粉、5％wt蔗糖、2％wt甘油、1％wt山梨醇、0.5％wt谷氨酸钠、5％海藻糖、0.1％wt维生素C、1％wt甘露醇以及1.5％脱纤维羊血，能使菌体冻干后的存活率为84％。但是，该保护剂含有较大比例的动物源成分，即脱脂奶粉和脱纤维羊血，其缺点是：一方面成本较高；另一方面容易混入动物源的病原体或致敏原，给疫苗产品带来了安全隐患。

发明内容

本发明要解决的问题是：提供一种肺炎链球菌无动物源冻干保护剂。

本发明的技术方案如下：

一种肺炎链球菌无动物源冻干保护剂，由如下成分组成：

1％～5％重量/体积的大豆胨，1％～5％重量/体积的海藻糖，4％～8％重量/体积的甘露醇和0.3％～1.5％体积/体积的甘油，余量为水。

进一步的，所述保护剂由如下成分组成：

1％～4％重量/体积的大豆胨，1％～4％重量/体积的海藻糖，6％～7％重量/体积的甘露醇和0.6％～1.2％体积/体积的甘油，余量为水。

进一步的，所述保护剂由如下成分组成：

1.5％～2.5％重量/体积的大豆胨，1.5％～2.5％重量/体积的海藻糖，6％～7％重量/体积的甘露醇和0.6％～0.7％体积/体积的甘油，余量为水。

进一步的，所述保护剂由如下成分组成：

2％重量/体积的大豆胨，2％重量/体积的海藻糖，6％重量/体积的甘露醇和0.6％体积/体积的甘油，余量为水。

一种肺炎链球菌冻干方法，该方法是将前述冻干保护剂与肺炎链球菌的菌体沉淀混合后，制备成菌悬液，进行冻干。

进一步的，所述肺炎链球菌的血清型为血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F或23F。

一种肺炎链球菌冻干粉，所述冻干粉是将前述冻干保护剂与肺炎链球菌的菌体沉淀混合后，制备成菌悬液，进行冻干得到的产物。

如前述的冻干粉，所述肺炎链球菌的血清型为血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F或23F。