[发明专利]一种蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的制备方法及蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的应用

权利要求书

1.一种蒲公英根多糖硫酸化修饰产物，其特征在于，蒲公英根多糖硫酸化修饰产物中多糖含量较未修饰前含量提高60％；

蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的制备方法包括以下步骤：

(1)将原料蒲公英根进行粉碎，后置于提取罐中，加入水进行沸水提取，将上清液经除杂浓缩后采用Sevag试剂离心除蛋白，离心，取上清液，加入无水乙醇混合均匀后沉淀过夜，然后进行抽滤后得到沉淀物，将沉淀物重新用蒸馏水溶解，水浴挥去乙醇，冷冻干燥后得蒲公英根粗多糖；

(2)蒲公英根粗多糖的分离

取步骤(1)制备得到的蒲公英根粗多糖，加蒸馏水溶解，离心后取上清液上样，用蒸馏水进行洗脱，再用不同浓度NaCl溶液梯度洗脱，并采用苯酚硫酸法进行追踪检测多糖含量，分别收集不同的洗脱峰，减压浓缩，透析袋透析，冷冻干燥，获得蒲公英根多糖；

(3)蒲公英根多糖的硫酸化修饰

取步骤(2)制备得到的蒲公英根多糖，采用氯磺酸-二甲基甲酰胺法进行修饰：准确称取蒲公英根多糖，加入吡啶，在冰浴条件下加入氯磺酸溶液，室温下搅拌，待混合溶剂逐渐融化变成淡黄色澄清液体，再加入甲酰胺，加热至全部溶解，冰浴至0℃，加入到硫酸衍生化试剂中搅拌溶解，于冰浴中反应至常温，用NaOH调节pH＝7～8，经透析后取透析液，浓缩，冻干，得到蒲公英根多糖硫酸化修饰产物。

2.权利要求1所述的蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的制备方法，其特征在于，蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的制备方法包括以下步骤：

(1)将原料蒲公英根进行粉碎，后置于提取罐中，加入其10-30倍体积的水，沸水提取3-5小时，重复2-3次，将上清液通过滤网除杂，适当浓缩，采用Sevag试剂离心除蛋白，离心，取上清液，加入2-4倍体积的无水乙醇，搅拌均匀，沉淀过夜，用布氏漏斗和滤纸进行抽滤，得到沉淀物，将沉淀物重新用蒸馏水溶解，50-60℃水浴挥去乙醇，用冷冻干燥机进行冻干，得蒲公英根粗多糖；

(2)蒲公英根粗多糖的分离

称取步骤(1)制备得到的蒲公英根粗多糖，加蒸馏水溶解，8000-12000rpm转速离心，取上清液上样，用流速为10-20ml/min的蒸馏水进行洗脱，再用0.0、0.2、0.5、1.0mol/LNaCl溶液梯度洗脱，并采用苯酚硫酸法进行追踪检测多糖含量，分别收集不同的洗脱峰，减压浓缩，2000-4000Da透析袋透析，冷冻干燥，获得蒲公英根多糖；

(3)蒲公英根多糖的硫酸化修饰

取步骤(2)制备得到的蒲公英根多糖，采用氯磺酸-二甲基甲酰胺法进行修饰：准确称取蒲公英根多糖，加入吡啶，在冰浴条件下加入氯磺酸溶液，室温下搅拌10-20min，待混合溶剂逐渐融化变成淡黄色澄清液体，再加入甲酰胺，加热至全部溶解，冰浴至0℃，加入到硫酸衍生化试剂中搅拌溶解，于冰浴中反应1-2h至常温，用NaOH，调节pH＝7～8，透析2天，取透析液，浓缩，冻干，得到蒲公英根多糖硫酸化修饰产物。

3.根据权利要求2所述的蒲公英根多糖硫酸化修饰产物的制备方法，其特征在于，步骤(3)准确称取蒲公英根多糖100mg，加入1mL吡啶，在冰浴条件下加入2mL氯磺酸溶液，室温下搅拌10-20min，待混合溶剂逐渐融化变成淡黄色澄清液体，再加入3mL甲酰胺，加热至全部溶解，冰浴至0℃，加入到硫酸衍生化试剂中搅拌溶解，于冰浴中反应1-2h至常温，用NaOH，调节pH＝7～8，透析2天，取透析液，浓缩，冻干，得到蒲公英根多糖硫酸化修饰产物。

4.权利要求1-3任一项所述的蒲公英根多糖硫酸化修饰产物应用于调节免疫力的保健食品或药品中。