[发明专利]一种从刺玫果肉中同时提取多种活性成分的方法

权利要求书

1.一种从刺玫果肉中同时提取多种活性成分的方法，其特征在于以刺玫果肉为原料，经过浸泡、循环联合提取、分离纯化、浓缩干燥步骤同时制备总皂苷含量大于50%的提取粉末、总黄酮含量大于70%的提取粉末和总多糖含量大于80%的提取粉末；

所述的方法按以下步骤进行：

1）浸泡：将新鲜刺玫果的果肉与籽分离，果籽用于提取原花青素，将刺玫果肉按照固液比1g:3.2mL加入40%乙醇水溶液、按照刺玫果肉质量的0.1%加入果胶酶，在室温和超声功率450W条件下超声处理25min，然后室温浸泡至平衡时间4h；

2）循环联合提取：将浸泡好的刺玫果肉，连同浸泡溶剂一起转移至第一根玻璃层析柱中，加入少许40%乙醇水溶液，保持溶剂没过刺玫果肉，按照刺玫果肉与40%乙醇水溶液固液比1g:3.2mL为一个收集单位，即1份，以0.4mL/min的流速进行收集，分别收集3份，得到刺玫果肉总黄酮提取液；然后将提取溶剂更换为第2种提取溶剂20%乙醇水溶液，按照刺玫果肉与20%乙醇水溶液固液比1g:2.8mL为一个收集单位，即1份，以0.4mL/min的流速进行收集，分别收集3份，得到刺玫果肉总皂苷提取液；然后将提取溶剂更换为第3种提取溶剂蒸馏水，按照刺玫果肉与蒸馏水固液比1g:2.8mL为一个收集单位，即1份，以0.4mL/min的流速进行收集，分别收集3份，得到刺玫果肉总多糖提取液；每种活性成分只保留各提取液中的前2份，第3份提取液作为下一根玻璃层析柱中刺玫果肉中相应活性成分的第1份提取溶剂，而且从第2根玻璃层析柱起不再浸泡至平衡时间，如此重复循环，4根玻璃层析柱循环连续进行；

3）分离纯化：合并四根玻璃层析柱的第一种提取溶剂40%乙醇水溶液的提取液，减压浓缩至每1mL相当于刺玫果肉1g的流浸膏，加入无水乙醇至乙醇体积分数达到80%，充分摇匀，冰箱4℃静置12h，6000r/min低温离心10min，得到粗多糖1和总黄酮离心液，留存待用；将四根玻璃层析柱的第2种溶剂20%乙醇水溶液的提取液和水提取液合并，减压浓缩至每1mL相当于刺玫果肉1g的流浸膏，加入无水乙醇至乙醇体积分数达到80%，充分摇匀，冰箱4℃静置12h，6000r/min低温离心10min，得到粗多糖2和总皂苷离心液，留存待用；将粗多糖1和粗多糖2沉淀合并，重新用蒸馏水溶解，然后加入无水乙醇至乙醇体积分数达到80%，充分摇匀，冰箱4℃静置12h，6000r/min低温离心10min，得到刺玫果肉总多糖沉淀；

将刺玫果肉总黄酮离心液和总皂苷离心液分别减压浓缩至无醇味得到刺玫果肉总黄酮待纯化液和总皂苷待纯化液，加入等量的蒸馏水稀释，然后按照大孔树脂与总黄酮待纯化液固液比1g:5mL，将刺玫果肉总黄酮待纯化液和总皂苷待纯化液分别加入到装有已经处理的D-101型大孔树脂的容器中，搅拌均匀，室温震荡吸附2h，静置24h，过滤，将吸附刺玫果肉总黄酮的D-101型大孔树脂放入到容器中，加入40%乙醇水溶液；将吸附刺玫果肉总皂苷的D-101型大孔树脂放入到容器中，加入20%乙醇水溶液，各自搅拌均匀，均室温震荡解吸附2h，静置24h，分别过滤，滤液即为刺玫果肉总黄酮纯化液和总皂苷纯化液；

4）浓缩干燥：将刺玫果肉总黄酮纯化液和总皂苷纯化液采用真空浓缩器于60℃浓缩，分别得到60℃相对密度为1.08～1.15g/mL的刺玫果肉总黄酮流浸膏和刺玫果肉总皂苷流浸膏，将两种流浸膏和刺玫果肉总多糖沉淀放置在微波-真空干燥箱中于60℃烘干，分别得到刺玫果肉总黄酮提取粉末，经硝酸铝-亚硝酸钠-氢氧化钠显色法测定其总黄酮的含量，其总黄酮含量高达70%以上；得到刺玫果肉总皂苷提取粉末，经香草醛-冰乙酸-70%硫酸显色法测定其总皂苷的含量，其总皂苷含量高达50%以上；得到刺玫果肉总多糖提取粉末，经苯酚-硫酸显色法测定其总多糖的含量，其总多糖含量大于80%。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于本发明的原料为去籽的刺玫果肉；浸泡时先按照固液比1g:3.2mL加入40%乙醇水溶液和刺玫果肉质量0.1%的果胶酶，并在室温和超声功率450W条件下超声处理25min，然后室温浸泡4h；提取时使用四根玻璃层析柱循环联合提取，总黄酮的提取溶剂为40%乙醇水溶液，总皂苷的提取溶剂为20%乙醇水溶液，总多糖的提取溶剂为蒸馏水，先使用40%乙醇水溶液提取刺玫果肉总黄酮，按照固液比1g:3.2mL分别收集3份提取液，其中第3份提取液为下一根玻璃层析柱中刺玫果肉总黄酮的第1份提取溶剂，然后继续用20%乙醇水溶液和蒸馏水分别提取刺玫果肉总皂苷和总多糖，均按照固液比1g:2.8mL分别收集3份提取液，其中第3份提取液为下一根玻璃层析柱中刺玫果肉总皂苷和总多糖的第1份提取溶剂；分离纯化时总黄酮、总皂苷使用醇沉与D-101型大孔树脂联合的方式进行纯化，醇沉浓度为80%，大孔树脂采用静态吸附与解吸附的方式对总黄酮、总皂苷进行纯化，刺玫果肉总多糖采用醇沉的方式与总皂苷分离；浓缩干燥时采用真空浓缩器对刺玫果肉总黄酮纯化液和总皂苷纯化液进行浓缩，浓缩温度为60℃，刺玫果肉总多糖沉淀与刺玫果肉总黄酮和总皂苷的流浸膏的干燥方式为在微波-真空干燥，干燥温度为60℃。