[发明专利]吩噻嗪半抗原、完全抗原及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种吩噻嗪半抗原、完全抗原及其制备方法和应用。本发明利用重氮化法在吩噻嗪分子上引入羧基，用混合酸酐法或碳二亚胺法将修饰后的吩噻嗪与载体蛋白偶联，制备完全抗原，完全抗原结构式如式Ⅱ所示。本发明对合成的吩噻嗪完全抗原进行了鉴定，优化了高效液相色谱法的鉴定条件。本发明制备的吩噻嗪完全抗原免疫效果好，动物免疫后获得的抗血清经间接酶联免疫测定抗体效价可达1:3000，本发明制备方法简单，成本低，适宜大规模推广应用。

技术领域

本发明涉及抗原制备技术领域，具体地说是一种吩噻嗪半抗原、完全抗原及其制备方法和应用。

背景技术

吩噻嗪药物在人体内消除速率较慢，容易在体内产生药物残留，特别是食用动物中残留的吩噻嗪类镇定剂经食物链进入人体后，可对人体的内分泌、运动和循环等系统以及肝脏器官造成不良影响，引起白细胞减少、肝功能障碍、粒细胞缺乏症、接触性皮炎和皮疹等毒副作用，给人体健康带来很大风险。检测动物源性食品中吩噻嗪残留常用仪器分析方法，免疫学检测方法应用较少，但相比于仪器分析方法，免疫学检测方法成本较低，检测时间短，适用于大批量样品现场检测。完全抗原作为免疫学检测方法的基础至关重要。为充实针对食品中吩噻嗪残留的免疫学检测方法，本发明成功制备吩噻嗪完全抗原，为之后建立相关的免疫学检测方法做基础。

由于吩噻嗪本身结构的特殊性，导致吩噻嗪合成抗原困难加重，现有的针对吩噻嗪合成抗原的方法大多操作复杂，制备过程费时费力，且充满危险性。为简化制备过程，降低危险性，本发明重新研究设计吩噻嗪合成完全抗原的合成路线，并设计此吩噻嗪完全抗原鉴定方法，以确保此完全抗原合成成功。

发明内容

本发明的目的就是提供一种吩噻嗪半抗原、完全抗原及其制备方法和应用，以为吩噻嗪的免疫学检测提供一种完全抗原。

本发明的目的是这样实现的：一种吩噻嗪半抗原，其分子结构式如式Ⅰ所示：

上述的吩噻嗪半抗原的制备方法，包括以下步骤：

(a)在2-6℃条件下，用HCL溶液调节对氨基苯甲酸溶液pH值至1-3，漩涡搅拌至溶液完全溶解；

(b)将所得酸性的对氨基苯甲酸溶液与亚硝酸钠溶液混合，得到浅黄色溶液，并于2-6℃冷藏20-40min；其中，对氨基苯甲酸与亚硝酸钠的摩尔比为1∶2-3；

(c)在步骤(b)所得溶液中加入吩噻嗪，其中，吩噻嗪与对氨基苯甲酸的摩尔比为1∶1，然后在暗室中磁力搅拌10-14h，即得所述吩噻嗪半抗原。

一种吩噻嗪完全抗原，其是由上述的吩噻嗪半抗原与载体蛋白Protein制备而成，其分子结构式如式Ⅱ所示：

上述的吩噻嗪完全抗原的制备方法，其通过混合酸酐法制备而成：

(a)在冰浴环境下，在吩噻嗪半抗原溶液中加入1，4-二氧六环和N-N-二甲基甲酰胺，震荡混合1-3min，静置5-15min后，加入三乙胺，再静置5-15min后加入氯甲酸异丁酯，然后移除冰浴，磁力搅拌20-40min；其中，吩噻嗪半抗原∶1，4-二氧六环∶N-N-二甲基甲酰胺∶三乙胺∶氯甲酸异丁酯＝0.1mmoL∶1-2mL∶1-2mL∶0.1-0.3nmoL∶0.1-0.2nmoL；

(b)取载体蛋白-硼酸钠溶液与步骤(a)所得反应液混合，其中，载体蛋白-硼酸钠：吩噻嗪半抗原＝12mg∶0.1mmoL，然后于2-6℃下反应10-14h，装入透析袋，在PBS缓冲液中透析60-80h，每隔4-8h换透析液，透析完成后即得所述吩噻嗪完全抗原。

上述的吩噻嗪完全抗原的制备方法，其通过碳二亚胺法制备而成：