[发明专利]靶向人IgE的单域抗体、人源化单域抗体及其应用

说明书

本发明涉及生物领域，公开了靶向人IgE的单域抗体、人源化单域抗体及其应用。特异性结合IgE的单域抗体，由框架区和抗原结合区CDR1～CDR3组成，其中CDR1～CDR3分如SEQ ID NO.：1～3、6～8所示。本发明一些实例的单域抗体，可以特异性结合人体免疫球蛋白IgE及其复合物，对其它免疫球蛋白或者血浆其它蛋白非特异性吸附量低，吸附性能稳定，吸附效率高且再生性能好，为I型变态反应病人提供了一种新的治疗途径。与传统抗体相比具有分子量小、稳定性强、高耐性、低免疫原性、在极端的温度和pH值下仍可保持稳定性、易于表达且表达量高适合于大规模生产，在临床治疗上安全性能好、经济效益高。

技术领域

本发明涉及一种单域抗体及其应用，具体涉及特异性结合IgE蛋白的单域抗体及其应用。

背景技术

血液免疫吸附治疗是近30年来新兴的一种临床医疗技术，一些药物没有明显疗效的疑难病症，如特应性皮炎、自身免疫系统疾病、肾病综合、重症肝炎、恶性肿瘤等进行体外免疫吸附血液净化往往可以获得较好的效果。血液免疫吸附治疗技术已被广泛地应用于肝脏病、急性中毒、血液、泌尿等多个临床领域。免疫吸附剂的研制和生产也已经成为一个重要的高新技术产业。

临床常见的过敏性哮喘、过敏性荨麻疹、过敏性皮炎、过敏性鼻炎和青霉素引起的过敏性休克导致患者体内的IgE浓度达到正常值的10倍以上，尤其是致敏原特异性IgE的浓度可以达到正常值的1000倍左右。目前临床主要以免疫抑制剂药物治疗，这些药物疗法对偶发性过敏反应治疗效果良好，但对需要长期服药的过敏性哮喘等慢性、顽固性过敏疾病治疗副作用很大，不仅不能治愈，且会产生药物依赖。近年来血液净化吸附治疗IgE过高导致的过敏反应成为一种新的趋势。

国外已有公司相继开发出IgE特异性吸附产品(WO2012140214A1)，将人源化的单链抗体使用大肠杆菌进行表达纯化，使用高碘酸钠氧化琼脂糖凝胶将纯化后的蛋白与琼脂糖偶联合成IgE吸附剂。该吸附剂制备偶联方法虽可大量偶联配基，但也会造成配基的易脱落问题同时偶联的间隔臂较短会导致吸附剂的吸附量偏低。日本学者Sato H将羊抗人IgE的IgG抗体固定至玻璃微珠，约1g固相载体偶联32.5mg的IgG蛋白制成IgE吸附柱，使用血液灌流的方法能使成年病人血液中IgE量从10000IU降低至3000IU效果非常显著(Specificremoval of IgE by therapeutic immunoadsorption system[J].Tournal ofimmunological methods.1989,118(2)；61-168.)，该吸附剂采用IgE抗体蛋白作为配基，可以特异性识别IgE蛋白，对IgE蛋白的去除效果显著且其它血浆蛋白损失较少，其主要缺陷在于采用玻璃微珠作为固相载体偶联抗体蛋白，容易造成配基的脱落，异源蛋白进入患者体内会成为新的致敏源，导致过敏反应加剧。同时该作者也考虑再串联一个以IgE为配基的吸附柱来吸附脱落的羊抗体，该方法无疑增加了临床治疗的复杂性且会增加制疗成本。国内学者贾凌云以IgE受体蛋白为配基，琼脂糖凝胶为固相载体制成IgE吸附剂(CN102660569A)，其很好的解决了配基脱落导致过敏反应加剧的问题，但其配基为大肠杆菌原核表达蛋白且为不溶性包涵体表达，需进行蛋白复性与去热原，导致提高了配基获取难度增加了生产成本，且复性后的蛋白稳定性差不易长期保存。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种特异性结合IgE蛋白的单域抗体及其应用。

本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提供：

特异性结合IgE的单域抗体，由框架区和抗原结合区CDR1～CDR3组成，其中：

CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.：1所示，序列为GIRFSNYG；CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.：2所示，序列为ISSATSTT；CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.：3所示，序列为NARWRDYEY；或