[发明专利]用于筛选VFM群体感应信号淬灭菌和抑制剂的报告系统及其构建方法

权利要求书

1.vfmE启动子，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2的第20-536位所示。

2.一种用于检测Dickeya属VFM群体感应信号的报告系统，其特征在于，所述的报告系统含有报告系统VR2，所述的报告系统VR2包含vfm基因簇和报告质粒，所述的报告质粒是以pPROBE-NT质粒为框架，在GFP基因前插入vfmE启动子得到的，所述的报告质粒包含抗性筛选基因、vfmE启动子及GFP基因，所述的GFP基因在vfmE启动子的控制下表达；所述的vfmE启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.2的第20-536位所示；所述的报告系统VR2是以Dickeyazeae MS2为受体菌，转入报告质粒后得到报告系统VR2。

3.根据权利要求2所述的报告系统，其特征在于，所述的报告系统还含有空白对照系统VR0，所述的空白对照系统VR0是以VFM缺失突变体△vfmE为受体菌，转入报告质粒后得到空白对照系统VR0；所述的报告质粒是以pPROBE-NT质粒为框架，在GFP基因前插入vfmE启动子得到的；所述的vfmE启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.2的第20-536位所示。

4.一种用于检测Dickeya属VFM群体感应信号的报告系统VR2的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.以Dickeya zeae MS2基因组DNA为模板，用引物pvfmE-F2和pvfmE-R2进行PCR扩增获得vfmE启动子片段；所述的引物pvfmE-F2为：ctgcaggtcgactctagagccgcaaaacgggctccgcttt，所述的引物pvfmE-R2为：aatctttagttagttaggggtcctgaatcaggttattgtt；

b.将vfmE启动子片段与经BamHI-HF和EcoRI-HF双酶切的pPROBE-NT质粒通过同源重组方式连接，得到重组质粒pVfmEpro2-gfp即为报告质粒；进一步转化E. coli DH5α感受态细胞，阳性克隆经PCR扩增、测序验证得到E. coli DH5α(pVfmEpro2-gfp)；

c.将E. coli DH5α(pVfmEpro2-gfp)、E. coli HB101(pRK2013)和Dickeya zeae MS2于LB平板上共培养进行接合重组，然后于含卡那霉素的MM平板筛选培养，挑单菌落PCR扩增验证，成功转入重组质粒pVfmEpro2-gfp的Dickeya zeae MS2菌即为报告系统VR2。

5.权利要求2-3任一项所述的用于检测Dickeya属VFM群体感应信号的报告系统在检测Dickeya属VFM群体感应信号中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，用报告系统VR2检测VFM群体感应信号，用空白对照系统VR0作为空白对照进行校正。