[发明专利]一种可注射微球体系在制备用于激活、扩增肿瘤浸润性T细胞的药物载体的应用

权利要求书

1.一种可注射微球体系在制备用于激活、扩增肿瘤浸润性T细胞的药物载体的应用，所述可注射微球体系的制备方法包括以下步骤：

（1）多孔微球的制备；

（2）包载细胞因子的纳米粒子的制备；

所述的纳米粒子包被的细胞因子包括所有由免疫细胞和某些非免疫细胞经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质；

（3）多孔微球表面通过酰胺键接枝包载细胞因子的纳米粒子；

（4）通过多巴胺基团将抗体嫁接于步骤（3）处理后的多孔微球表面；

所述的抗体为具有免疫调节作用的IgG类抗体。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述多孔微球由不同浓度的甲基丙烯酰化明胶GelMA制备而成。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述纳米粒子为表面具有氨基功能基团的缓释颗粒。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的IgG类抗体包括CD3抗体和CD28抗体。

5.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，步骤（1）的制备方法包括以下步骤：

以混入 0.1-2% 光引发剂的浓度为5-20%的GelMA 溶液作为分散相，肉豆蔻酸异丙酯作为连续相，通过微量注射推进泵分别以（1:5）-（1:20）的速度注入两相液体，在剪切力的作用下，分散相形成单个连续液体，不同速度差下形成的液滴尺寸不同，将收集的液滴经6.9 mWcm^-2UV 交联30s-2min，经乙醇和ddH₂O 清洗后，冷冻干燥形成多孔 GelMA水凝胶多孔微球。

6.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，步骤（2）的制备方法包括以下步骤：

所述纳米粒子为BSA 纳米粒子，采用脱溶技术制备BSA 纳米粒子，将10-100 mg 的BSA溶于1-10mL的ddH₂O中，在磁力搅拌器持续搅拌作用下通过微量注射泵以2 mL/min的速度泵入2-40 mL无水乙醇，随后持续搅拌过夜； 利用微量注射泵以2 mL/min的速度泵入2-40mL壳聚糖溶液，紧接着以 0.5 mL/min的速度泵入 1-10 mL无水乙醇；搅拌10h后，即可得到壳聚糖稳定的 BSA 纳米粒子；利用高速离心机以12000 r/min的速度离心 20min收集，收集得到的纳米粒子用50 %的乙醇溶液清洗 2-3遍；细胞因子均以理想浓度放置-80℃冰箱保存，制备包载细胞因子的纳米粒子时，在5 mL 10 mg/mL的BSA 溶液中各加100 μL。

7.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，步骤（3）的制备方法包括以下步骤：

取10-30 mg羧基修饰微球分散到MES buffer 中，连续加入60-90mg EDC和90-135mgNHS，超声15s后放入37℃恒温摇床反应 15min；取10-30 mg步骤（2）制得的纳米粒子分散在10 mL PBS溶液中；将反应后的微球快速离心弃上清，将含有纳米粒子的 PBS 加入微球的管内，快速超声30s后过夜反应，之后离心洗涤即可。

8.根据权利要求1-4任一项所述的一种缓慢释放细胞因子和抗体的可注射功能化微球的制备方法，其特征在于，步骤（4）的制备方法包括以下步骤：

将步骤（3）制得的微球浸泡在多巴胺盐酸盐溶液中室温放置24h，然后用灭菌的ddH₂O清洗 5 次，将FITC 标记的抗CD34抗体αCD3和抗CD28抗体αCD28稀释50 倍，把微球放入抗体溶液中4℃反应24小时，即包被成功。

9.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤浸润性T细胞为所有实体肿瘤内的肿瘤浸润性T细胞。