[发明专利]基于邻位诱导免疫分析的特异性杂交瘤细胞化学发光筛选方法

权利要求书

1.一种基于邻位诱导免疫分析的特异性杂交瘤细胞化学发光筛选方法，其特征在于该筛选方法以含有抗原-DNA1偶联物、抗原-DNA2偶联物、双链DNA探针、模板DNA、脱氧核糖核苷三磷酸(dNTPs)、核酸连接酶SplintR和聚合酶phi29的溶液为检测溶液，以杂交瘤细胞培育1天后的上清液为样品溶液，当杂交瘤细胞为特异性杂交瘤细胞时，样品溶液中会有特异性抗体存在，其能被抗原-DNA1偶联物和抗原-DNA2偶联物同时免疫结合，基于邻位效应，DNA1与DNA2进行杂交组装并与双链DNA探针中的封闭链DNA杂交，进而释放出引物链DNA并引发滚环扩增反应，产生的大量焦磷酸根离子(PPi)能络合辣根过氧化物酶-Cu²⁺复合物(HRP-Cu²⁺)中的Cu²⁺，从而恢复HRP的活性，催化鲁米诺和过氧化氢反应产生化学发光信号，实现对特异性抗体的定量分析和对特异性杂交瘤细胞的筛选。

2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于所述的双链DNA探针是长封闭链DNA和短引物链DNA的杂交物。

3.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于所述的DNA1和DNA2在邻位效应下，能进行杂交组装并进一步与封闭链DNA杂交，释放引物链DNA。

4.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于所述的引物链DNA能与模板DNA杂交，并在SplintR作用下形成环状模板DNA。

5.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于如下检测步骤：

(1)把杂交瘤细胞通过有限稀释法单细胞分配在96孔板中，培育1天后，取上清液与检测溶液混合，37℃反应1个小时；

(2)加入HRP-Cu²⁺溶液，反应5分钟后，再加入鲁米诺和过氧化氢的混合液，立即用化学发光成像仪测化学发光强度；

(3)利用标准曲线法，求出上清液中特异性抗体的浓度，并筛选出特异性杂交瘤细胞。