[发明专利]一种进展性缺血性脑卒中模型的构建方法

说明书

本发明公开了进展性缺血性脑卒中模型的构建方法。进展性缺血性脑卒中是一种特殊类型的卒中，表现为神经功能缺损持续加重，预后差，缺乏有效药物，临床治疗非常棘手。由于缺少能够准确模拟进展性卒中病理过程的动物模型，导致该病的病理机制研究和治疗药物研发均受到较大局限。本发明通过改进光化学栓塞法的相关实验参数，使动物的脑缺血损伤程度符合进展性卒中的病理特点，成功构建了进展性缺血性脑卒中模型。本发明的有益效果主要体现在：提供了一种小鼠进展性缺血性脑卒中模型的新造模方法，填补了学术界进展性缺血性脑卒中动物模型的空白。同时，手术简便易行，动物创伤小，重复性好，且接近人类血栓性脑卒中的发病过程，对该病的病理机制研究和新药新靶点研发具有重要的应用价值。

(一)技术领域

本发明涉及一种进展性缺血性脑卒中模型的构建方法。

(二)背景技术

缺血性脑卒中是一种严重的神经系统疾病，已经成为我国主要的致死和致残病因。进展性脑卒中(progressive ischemic stroke，PIS)是缺血性脑卒中的一个特殊类型，指脑卒中虽经临床积极干预，但导致脑缺血的原发病理过程仍继续进展，发病数天至一周内，出现神经功能缺损逐渐进展或阶梯式加重的一类脑梗死，约占缺血性脑卒中的30％。相比其它脑卒中类型，进展性脑卒中患者致残致死率更高，预后更差，神经功能缺损更严重，一旦发生，仅以对症治疗为主，是临床较难控制的卒中类型。由于病人入院后症状加重，常引起医疗纠纷。因此，亟需探明进展性脑卒中的关键发病机制，并寻找有效的药物干预方法。

相比于其他类型的脑卒中，进展性脑卒中的临床与基础研究较少且滞后，其主要原因与缺乏精准有效的动物研究模型有关。经典的线栓模型、光化学栓塞模型和大鼠脑血栓栓塞模型主要模拟的均是急性缺血性脑损伤的常规发病过程，并不能准确反映出进展性卒中的病理变化特征——脑梗死后一周左右患者神经功能会出现标志性的二次恶化现象，故不能直接应用于进展性卒中的研究，亟需构建新型针对进展性卒中的动物模型，以推动该类疾病的病理机制研究及相关治疗药物的研发进程。

(三)发明内容

本发明目的是一种进展性缺血性脑卒中模型的构建方法。

本发明采用的技术方案是：

一种进展性缺血性脑卒中模型的构建方法，其特征在于所述方法是采用光化学栓塞法，使用的冷光源可见光发光直径为2.0～2.5mm，光源垂直贴于颅骨上方，并使光源圆心较前卤向右偏移1.0～1.5mm；先腹腔注射玫瑰红溶液，剂量为80～100mg/kg，3～5min后进行冷光源照射10～15min，冷光源强度为150000～16000lux，照射结束后后移除冷光源，缝合切口并消毒，腹腔注射青霉素，剂量为2～5万U/kg，将动物置于恒温平板上至其苏醒体温恢复正常，并放回笼内继续饲养14天以上，获得进展性缺血性脑卒中模型。

光化学栓塞法的常规做法：采用固定波长光源，通常为波长560nm的光束，光照直径5.0mm左右，照射大脑中动脉起始端，时长20min，主要模拟的是急性局灶性大脑中动脉栓塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)。MCAO是最经典的急性脑缺血模型，缺血损伤较重，表现为动物脑梗死体积大，神经功能评分较低，但缺血后期并无损伤持续加重的现象，所以明显区别于进展性卒中的疾病特点。本发明对经典光化学栓塞法的实验参数进行了重点优化和改进：首先，照射脑区选择了运动皮层，相比于大脑中动脉起始端，照射该脑区会针对性损伤动物的运动功能，而对其他脑区和功能的影响较小，能更好地模拟进展性卒中的疾病特点；其次，通过反复摸索实验条件，最终将光照直径缩小至2.0mm，照射时间缩短至15min，可大大减轻动物的急性期损伤，表现为动物的脑梗死体积更小，死亡率更低，模型稳定性更好，更有利于对缺血后期神经功能和组织学改变的研究(进展性卒中的关键病理特征主要发生于缺血后期)；再次，所用的冷光源优化为非固定波长可见光光源，并经反复试验，最终确定了最优化的光照强度，相比于固定波长光源，最大的优势是实验成本降低，设备可及性高。

具体的，所述方法包括如下顺序步骤：