[发明专利]Gstp1在制备增效型CAR-T中的应用

说明书

本发明公开了Gstp1在制备增效型CAR‑T中的应用。具体公开了一种抑制T细胞活性氧(Reactive oxygen species，ROS)的CAR‑T细胞、及其构建方法和应用，所述CAR‑T中的CAR包含B7H3抗原结合结构域、跨膜结构域、胞内信号结构域以及GSTP1基因，制备得到的CAR‑T不仅对表达B7H3的肿瘤细胞具有高效的杀伤能力，而且高表达GSTP1后的CAR‑T能够抑制其自身ROS的产生，进一步增强CAR‑T细胞的杀伤功能，可针对广谱的实体肿瘤，应用范围广，不但对本领域具有较高的参考价值，而且具有良好的应用潜力。

技术领域

本发明属于肿瘤免疫治疗领域，具体地，涉及一种嵌合抗原受体，其包含B7H3抗原结合结构域、跨膜结构域、胞内信号结构域以及人源GSTP1，更具体地，涉及一种降低T细胞活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的CAR-T细胞、及其构建方法和应用。

背景技术

嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(Chimeric antigen receptor T-cellimmunotherapy，CAR-T)作为一种新兴的肿瘤过继免疫疗法，其利用基因工程技术将逆转录病毒和慢病毒载体转座系统或直接将mRNA转导到T细胞内，使T细胞获得识别特异性肿瘤细胞的能力并激活T细胞杀死肿瘤细胞的嵌合抗体，通过将这些T细胞回输至患者体内使患者的免疫系统获得特异性识别和杀伤肿瘤的能力(Shi H,Sun M,Liu L,et al.Chimericantigen receptor for adoptive immunotherapy of cancer:latest research andfuture prospects[J].Molecular cancer,2014,13(1):1-8.)，CAR-T的核心作用元件是嵌合抗原受体CAR，它由T细胞受体(T cell receptor，TCR)的胞内信号转导区、跨膜区以及胞外抗原结合区组成，其胞外区负责抗原的特异性地识别(Melenhorst J J,Levine BL.Innovation and opportunity for chimeric antigen receptor targeted Tcells[J].Cytotherapy,2013,15(9):1046-1053.)，CAR-T技术因对恶性肿瘤细胞的靶向性、杀伤活性和持久性强而在癌症等恶性疾病的治疗中展示出了巨大的应用前景。

B7H3，又称CD276，是一种I型跨膜蛋白，属于B7免疫共刺激和共抑制家族，其主要形式为包含两个细胞外串联的IgV-IgC结构域(即：IgV-IgC-IgV-IgC)(Collins M,Ling V,Carreno B M.The B7 family of immune-regulatory ligands[J].Genome biology,2005,6(6):1-7.)，具有免疫抑制功能，可以减少T细胞释放的I型干扰素(IFN)、降低NK细胞的细胞毒性。B7H3 mRNA在大多数组织表达，但其蛋白在正常组织(例如前列腺、乳腺、肝脏和淋巴器官)中表达非常有限，然而B7H3蛋白在在大部分恶性肿瘤及肿瘤相关成纤维细胞表面均异常高表达。多个独立实验已经证实了在多种恶性肿瘤细胞中B7H3蛋白均显著高表达，且这种高表达与恶性肿瘤疾病的严重程度密切相关(Zang X,Allison J P.The B7family and cancer therapy:costimulation and coinhibition[J].Clinical cancerresearch,2007,13(18):5271-5279.)，并且表明了B7H3参与肿瘤的免疫逃逸过程(Hofmeyer K A,Ray A,Zang X.The contrasting role of B7-H3[J].Proceedings ofthe National Academy of Sciences,2008,105(30):10277-10278.)。