[发明专利]Cas9蛋白、含有Cas9蛋白的基因编辑系统及应用

权利要求书

1.一种Cas9蛋白，所述Cas9蛋白为：

a)具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的Sa-SchCas9蛋白，

具有SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的Sha2Cas9-HF1蛋白，

具有SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的Sha2Cas9-HF2蛋白，

具有SEQ ID NO:9所示氨基酸序列的Sha2Cas9-R247A蛋白，

具有SEQ ID NO:10所示氨基酸序列的SpeCas9-HF1蛋白，

具有SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的SpeCas9-HF2蛋白，或

具有SEQ ID NO:12所示氨基酸序列的SpeCas9-HF3蛋白，

或者为

具有与SEQ ID NO:1、以及SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:12中任一个所示的氨基酸序列至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％、至少99.9％、至少99.95％、至少99.99％、至少99.999％、至少100％、或者80％-100％中任一百分比的序列同一性并且保留其生物学活性的氨基酸序列的同源物。

2.一种缀合物，所述缀合物包含：

a)Cas9蛋白，所述Cas9蛋白为：

1)具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的Sa-SchCas9蛋白，

具有SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的SchCas9蛋白，

具有SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的Sha3Cas9蛋白，

具有SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的SmiCas9蛋白，

具有SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的Sha2Cas9蛋白，

具有SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的SpeCas9蛋白，

具有SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的Sha2Cas9-HF1蛋白，

具有SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的Sha2Cas9-HF2蛋白，

具有SEQ ID NO:9所示氨基酸序列的Sha2Cas9-R247A蛋白，

具有SEQ ID NO:10所示氨基酸序列的SpeCas9-HF1蛋白，

具有SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的SpeCas9-HF2蛋白，

具有SEQ ID NO:12所示氨基酸序列的SpeCas9-HF3蛋白，

具有SEQ ID NO:13所示氨基酸序列的SdeCas9蛋白，

具有SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的SwaCas9蛋白，

具有SEQ ID NO:15所示氨基酸序列的MscCas9蛋白，

具有SEQ ID NO:16所示氨基酸序列的SsiCas9蛋白，

具有SEQ ID NO:17所示氨基酸序列的SlcCas9蛋白，

具有SEQ ID NO:18所示氨基酸序列的Slc2Cas9蛋白，

具有SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的Slc3Cas9蛋白

具有SEQ ID NO:20所示氨基酸序列的Sch2Cas9蛋白，

具有SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的SroCas9蛋白，

具有SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的MflCas9蛋白，或

具有SEQ ID NO:23所示氨基酸序列的Swa2Cas9蛋白；或者为2)具有SEQ ID NO:1、SEQID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ IDNO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ IDNO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ IDNO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:23中任一个所示的氨基酸序列至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％、至少99.9％、至少99.95％、至少99.99％、至少99.999％、至少100％、或者80％-100％中任一百分比的序列同一性并且保留其生物学活性的氨基酸序列的同源物；

b)修饰部分；

例如，所述修饰部分选自另外的蛋白或多肽、可检测标记或其组合；

例如，所述另外的蛋白或多肽选自表位标签、报告蛋白或核定位信号(NLS)序列、胞嘧啶脱氨酶(CBE)、腺嘌呤脱氨酶(ABE)、胞嘧啶甲基化酶DNMT3A和MQ1、胞嘧啶去甲基化酶Tet1、转录激活蛋白VP64、p65和RTA、转录抑制蛋白KRAB、组蛋白乙酰化酶p300、组蛋白去乙酰化酶LSD1、和内切酶FokI中的一种或者多种；

以及

c)任选的用于连接所述Cas9蛋白与所述修饰部分的接头。