[发明专利]一种泡桐的组织培养方法

权利要求书

1.一种泡桐的组织培养方法，其特征在于：所述该泡桐的组织培养方法所需要的原料有泡桐植株、洗洁精或饱和洗衣服溶液、75%的酒精溶液、多菌灵和培养基。

2.根据权利要求1所述的一种泡桐的组织培养方法，其特征在于：所述泡桐的组织培养方法如下：

S1:外植体的选择

泡桐无菌建立材料可以用枝条的节段和顶芽作为外植体，本方法中选择生长良好的当年生半木质化的泡桐枝条上部，前一天对选择的枝条喷施多菌灵溶液，多菌灵采用喷灌的方式配成1:1000的溶液喷洒在枝条表面，将剪下的枝条除去叶片，切出带腋芽的茎段和顶芽；

S2:外植体的处理

将前期选择好的带腋芽茎段和顶芽作为外植体，用洗洁精或者饱和洗衣服溶液洗净，用刷子刷去外植体表面不易除去的污渍，使用流动的自来水冲洗20min，然后将洗净后的外植体放在超净台上，使用75%的酒精溶液浸泡30s，浸泡完成后使用无菌水冲洗3~4次，再将其浸入0.1%升汞溶液11min~18min，再使用无菌水冲洗3~5次，最终取出沥干水分，切出带有芽点的呈0.5cm见方的小茎段；

S3:初代培养

将上述经过处理后的泡桐带腋芽茎段或顶芽外植体放入配方为MS+6-BA2~4.00mg/L+IBA0.01~0.05mg/L+糖30g/L+卡拉胶6g/L的芽诱导培养基中，使其经过一段时间分化出芽，再此过程中培养基处于恒温25℃~28℃之间，光照在500~800lx之间，持续光照10~12h/d，接种后5~6天开始出芽，经过15~20天左右诱导出的芽即可进行转接；

S4:增殖培养

上述初代培养得到的可供使用的芽数量不充足，需要对初代培养出来的芽苗进行进一步的增殖培养，将上述初代培养得到的高为2~3cm的小芽接种到配方为1/2MS+6-BA3.0mg/L+IBA0.01mg/L+糖30g/L+卡拉胶6g/L的芽增殖培养基中进行芽增殖，培养温度为25~28℃，光照强度在1500~2000lx之间，光照时间为10~12h/d，经过10~15天后得到增殖芽，在增殖芽生长到和原先差不多的2~3cm时，继续将增殖芽放入相同配方为1/2MS+6-BA3.0mg/L+IBA0.01mg/L+糖30g/L+卡拉胶6g/L的芽增殖培养基中进行增殖，经过5~6次的连续增殖得到数量充足的增殖芽，即可进行下一步培养操作；

S5:生根培养

将在增殖培养中生长到4~5cm的泡桐增殖芽基部膨大的部分切除，选取泡桐上部生长良好的部分接种到配方为1/2MS+IBA1.0~1.5mg/L+NAA0.5~1.0mg/L蔗糖15~20g/L+卡拉胶5g/L的生根培养基中进行生根培养，在此期间培养基恒温25~28℃，光照强度在500~800lx，光照时间为10~12h/d，经过7~10天的培养接种的部分即可生根，其中前期被切下的基部膨大部分可以重新放入增殖培养基中，使其继续分化出苗，从而提高植物的利用率。