[发明专利]一种副干酪乳杆菌S-NB基因缺失突变株及其构建方法和应用在审

专利信息
申请号: 202110764061.5 申请日: 2021-07-06
公开(公告)号: CN113652384A 公开(公告)日: 2021-11-16
发明(设计)人: 李伟;肖路遥;贺茹;许丹玲 申请(专利权)人: 南京农业大学
主分类号: C12N1/21 分类号: C12N1/21;C12N15/74;C12N15/65;C12N15/90;C12R1/225
代理公司: 南京天华专利代理有限责任公司 32218 代理人: 吴爽;徐冬涛
地址: 211225 江苏省南京市溧*** 国省代码: 江苏;32
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要:
搜索关键词: 一种 干酪 杆菌 nb 基因 缺失 突变 及其 构建 方法 应用
【权利要求书】:

1.一种副干酪乳杆菌S-NB基因缺失突变株,其特征在于,以副干酪乳杆菌S-NB为出发菌株,使所述副干酪乳杆菌S-NB中的cps基因上游片段被敲除质粒携带的cps基因上游同源臂基因替换,副干酪乳杆菌S-NB中的cps基因下游基因片段被敲除质粒携带的cps基因下游同源臂基因替换;其中,cps基因上游同源臂基因碱基序列如SEQ ID NO:1所示,cps基因下游同源臂基因碱基序列如SEQ ID NO:2所示。

2.根据权利要求1所述的副干酪乳杆菌S-NB基因缺失突变株,其特征在于,所述敲除质粒以pNZ5319为骨架。

3.根据权利要求1所述的副干酪乳杆菌S-NB基因缺失突变株,其特征在于,所述副干酪乳杆菌S-NB保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏日期:2021年5月4日,保藏地址:中国 武汉 武汉大学,保藏编号为CCTCC NO:M 2021461。

4.一种副干酪乳杆菌S-NB基因缺失突变株的构建方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:

S1、以pNZ5319质粒为模板,反向PCR扩增出敲除质粒骨架,正向PCR扩增出氯霉素抗性基因;

S2、以副干酪乳杆菌S-NB基因组DNA为模板,分别PCR扩增cps基因上游同源臂基因和cps基因下游同源臂基因;

S3、一步克隆将氯霉素抗性基因、cps基因上游同源臂基因和cps基因下游同源臂基因三片段与敲除质粒骨架进行连接,热击转化大肠杆菌感受态细胞后筛选出敲除质粒;

S4、将步骤S3所得的敲除质粒电转化至副干酪乳杆菌S-NB感受态细胞中,对转化后获得的副干酪乳杆菌S-NB突变株进行双抗验证,筛选出双交换转化子;

S5、将步骤S4所得的双交换转化子制备感受态,电击转化pMSPCre质粒,构建副干酪乳杆菌S-NB△cps突变株。

5.根据权利要求4所述的副干酪乳杆菌S-NB基因缺失突变株的构建方法,其特征在于,步骤S1中反向PCR扩增出的敲除质粒骨架和正向PCR扩增出的氯霉素抗性基因进行DpnⅠ酶切处理去除模板残留。

6.根据权利要求4所述的副干酪乳杆菌S-NB基因缺失突变株的构建方法,其特征在于,步骤S4中将敲除质粒电转化至副干酪乳杆菌S-NB感受态细胞中,电击转化参数为:2kV,电击时间:3mS。

7.权利要求4所述的构建方法构建得到的副干酪乳杆菌S-NB△cps突变株。

8.权利要求6所述的副干酪乳杆菌S-NB△cps突变株在分析荚膜多糖对副干酪乳杆菌益生功能的分子机制中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用,所述应用为所述的副干酪乳杆菌S-NB△cps突变株在生物膜的形成方面中的应用。

下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于南京农业大学,未经南京农业大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202110764061.5/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。

×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top