[发明专利]一种副干酪乳杆菌S-NB基因缺失突变株及其构建方法和应用在审
申请号: | 202110764061.5 | 申请日: | 2021-07-06 |
公开(公告)号: | CN113652384A | 公开(公告)日: | 2021-11-16 |
发明(设计)人: | 李伟;肖路遥;贺茹;许丹玲 | 申请(专利权)人: | 南京农业大学 |
主分类号: | C12N1/21 | 分类号: | C12N1/21;C12N15/74;C12N15/65;C12N15/90;C12R1/225 |
代理公司: | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人: | 吴爽;徐冬涛 |
地址: | 211225 江苏省南京市溧*** | 国省代码: | 江苏;32 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 干酪 杆菌 nb 基因 缺失 突变 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种副干酪乳杆菌S-NB基因缺失突变株,其特征在于,以副干酪乳杆菌S-NB为出发菌株,使所述副干酪乳杆菌S-NB中的
2.根据权利要求1所述的副干酪乳杆菌S-NB基因缺失突变株,其特征在于,所述敲除质粒以pNZ5319为骨架。
3.根据权利要求1所述的副干酪乳杆菌S-NB基因缺失突变株,其特征在于,所述副干酪乳杆菌S-NB保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏日期:2021年5月4日,保藏地址:中国 武汉 武汉大学,保藏编号为CCTCC NO:M 2021461。
4.一种副干酪乳杆菌S-NB基因缺失突变株的构建方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
S1、以pNZ5319质粒为模板,反向PCR扩增出敲除质粒骨架,正向PCR扩增出氯霉素抗性基因;
S2、以副干酪乳杆菌S-NB基因组DNA为模板,分别PCR扩增
S3、一步克隆将氯霉素抗性基因、
S4、将步骤S3所得的敲除质粒电转化至副干酪乳杆菌S-NB感受态细胞中,对转化后获得的副干酪乳杆菌S-NB突变株进行双抗验证,筛选出双交换转化子;
S5、将步骤S4所得的双交换转化子制备感受态,电击转化pMSPCre质粒,构建副干酪乳杆菌S-NB△
5.根据权利要求4所述的副干酪乳杆菌S-NB基因缺失突变株的构建方法,其特征在于,步骤S1中反向PCR扩增出的敲除质粒骨架和正向PCR扩增出的氯霉素抗性基因进行DpnⅠ酶切处理去除模板残留。
6.根据权利要求4所述的副干酪乳杆菌S-NB基因缺失突变株的构建方法,其特征在于,步骤S4中将敲除质粒电转化至副干酪乳杆菌S-NB感受态细胞中,电击转化参数为:2kV,电击时间:3mS。
7.权利要求4所述的构建方法构建得到的副干酪乳杆菌S-NB△
8.权利要求6所述的副干酪乳杆菌S-NB△
9.根据权利要求8所述的应用,所述应用为所述的副干酪乳杆菌S-NB△
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于南京农业大学,未经南京农业大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202110764061.5/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇:预印液和瓦楞纸的印刷方法
- 下一篇:一种用于物流仓储场地的消防烟雾报警系统