[发明专利]一种构建全脑神经元网络连接图谱的方法

权利要求书

1.一种构建全脑神经元网络连接图谱的方法，其特征在于，包括：

将荧光标记物注射至脑区，进行脑坐标定位，

对目标脑区进行示踪病毒的立体定位微量注射，

在病毒表达期后，取脑组织样本，

将所述脑组织样本制备为脑组织切片，

对所述脑组织切片进行连续扫描成像，获得全脑图像，

使用交互式WholeBrain框架对所述全脑图像进行数据统计和分析，获得所述目标脑区与全脑范围连接的图谱。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述荧光标记物为荧光染料羰化青Dil。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，利用连续荧光自动切片扫描系统将所述脑组织样本的全部脑组织切片按照由前至后的顺序进行自动扫描成像，得到所述脑组织样本的全脑图像。

4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，所述数据统计和分析包括：对每个脑组织切片上示踪病毒标记的神经元数目进行计数，得到每个脑区中每个标记单元格的像素位置的原始数据。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述数据统计和分析还包括：将每一层面图像的神经元坐标原始数据转换为R数据，然后将其与对应的鼻尾位置对齐的相应层面图像注册到艾伦标准脑全脑图集中，在WholeBrain框架中进行进一步分析，根据WholeBrain框架编辑图集后的脑区的轮廓获得神经元所在的脑区，统计每个脑区中示踪病毒标记的神经元数目。

6.根据权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于，所述示踪病毒为顺行示踪病毒rAAV和/或逆行示踪病毒retro-AAV；

优选地，所述示踪病毒的立体定位注射采用玻璃电极进行。

7.根据权利要求1～6任一项所述的方法，其特征在于，所述立体定位微量注射中，目标脑区三维坐标为将小鼠脑颅骨前囟点作为参照点，利用FranklinPaxinos标准脑图谱确定。

8.根据权利要求1～7任一项所述的方法，其特征在于，取脑组织样本后，先将脑组织样本在3-5％的PFA溶液中于2-4℃固定10-14h，漂洗固定后的样本，利用18-22％的蔗糖溶液对漂洗后的样本进行脱水，再利用28-32％的蔗糖溶液继续进行脱水，将脱水后的脑组织进行脑组织切片的制备。

9.根据权利要求1～8任一项所述的方法，其特征在于，所述脑组织切片为冰冻切片。

10.权利要求1～9任一项所述的方法在全脑神经网络分析或神经元之间的连接关系分析中的应用。