[发明专利]一种人干细胞因子皮肤修复液的智能制备方法

说明书

本发明提供一种人干细胞因子皮肤修复液的智能制备方法，采用一种培养箱配合完成，所述制备方法包括以下步骤：1)、无菌采集脐带血，采用组织块直接培养法放入培养箱内进行培养；2)、弃组织块后，更换新鲜无血清培养基继续放入培养箱内进行培养；3)、细胞融合90％后，收取上清液，再加入胰酶消化，离心，获得细胞。本发明可自动对培养皿内的细胞进行检测，避免工作人员频繁检测，减少打开第一门体的频率，减少人们的劳动强度，且大大减少了箱体与外界的连通面积和时间，减少空气交换，从而方便稳定控制箱体内的温湿度和气体含量，减少波动，并降低能耗，并且稳定较高，便于人们使用。

技术领域

本发明涉及皮肤修复液制备技术领域，尤其涉及一种人干细胞因子皮肤修复液的智能制备方法。

背景技术

干细胞(stem cell)是一类具有自我更新、自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞，干细胞可以分为胚胎干细胞和成体干细胞，根据不同的分化潜能分类可分为全能干细胞、多能干细胞、单能干细胞，其具有多向分化潜能、无限地分裂、增殖等特性，简单来讲，它是一类具有多向分化潜能和自我复制能力的原始的未分化细胞，是形成哺乳类动物的各组织器官的原始细胞。干细胞在形态上具有共性，通常呈圆形或椭圆形，细胞体积小，核相对较大，细胞核多为常染色质，并具有较高的端粒酶活性。干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞；

人体的衰老，皱纹的出现，究其根源实质上都是细胞的衰老和减少。而细胞的衰老和减少则是由干细胞老化引起的。干细胞是各种组织细胞更新换代的种子细胞，是人体细胞的生产厂。干细胞族群的老化严重减弱了其增殖和分化的能力，新生的细胞补充不足，衰老细胞不能及时被替代，全身各系统功能下降，让人一天天老去。而皮肤，也因为皮肤干细胞的衰老而无法及时更新，衰老的皮肤得不到修复，因此人们基于人干细胞制备一种皮肤修复液；

在现有的皮肤修复液的制备中，大都是通过人干细胞培养增值而成，在制备时，需要将细胞置于培养基中，然后放入培养箱内保持一定的温度、湿度，二氧化碳浓度，氧气浓度等条件；

但是现有的培养箱结构简单，人们取出培养样本时，需要经常观察培养箱内的细胞增值情况以及营养液的使用情况，使得营养液缺失或者细胞增值数量过大时，需要更换营养液或者稀释细胞，人们就需要将培养箱打开取出更换，培养箱打开，导致培养箱内部空气与外部连通，导致培养箱内的温湿度以及气体含量失衡，影响细胞的培养。

因此，有必要提供一种人干细胞因子皮肤修复液的智能制备方法解决上述技术问题。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明是提供一种人干细胞因子皮肤修复液的智能制备方法。

本发明提供的一种人干细胞因子皮肤修复液的智能制备方法，采用一种培养箱配合完成，所述制备方法包括以下步骤：

1)、无菌采集脐带血，采用组织块直接培养法放入培养箱内进行培养；

2)、弃组织块后，更换新鲜无血清培养基继续放入培养箱内进行培养；

3)、细胞融合90％后，收取上清液，再加入胰酶消化，离心，获得细胞；

4)、将细胞接种于培养器中进行培养，加入无血清培养基继续传代；

5)、收取细胞培养液，离心，并通过0.2μm孔径过滤器过滤；

6)、将上清液以分子量为指标进行筛选，获得由分子量为6.201KD的表皮生长因子、分子量为15.3KD的酸性成纤维细胞生长因子、分子量为16～18.5KD的碱性成纤维细胞生长因子和分子量为32～45KD的血管内皮生长因子构成的混合物；