[发明专利]一种JAK3启动子甲基化的检测引物组合物、应用及检测方法

说明书

本发明公布了一种JAK3启动子甲基化的检测引物组合物、应用及检测方法，通过设计检测引物组合物cg04557677‑F、cg04557677‑Rbio和cg04557677‑S，利用焦磷酸测序技术检测JAK3启动子cg04557677甲基化的水平。本发明所述的JAK3启动子甲基化水平的检测方法灵敏度及准确性高，对于肾癌的病理分期及早期检测、预后和风险评估具有重要的意义。

技术领域

本发明属于分子生物检测技术领域，具体涉及一种JAK3启动子甲基化的检测引物组合物、应用及检测方法。

背景技术

肾癌是起源于肾实质的恶性肿瘤，肾癌高发年龄段为50-70岁，在成人恶性肿瘤中占2-3％，位列我国泌尿系统恶性肿瘤发病率的第二位，仅次于膀胱癌，近年其发病率逐步上升。据研究，肾癌术后不同危险度的患者其5年生存率不同，低危患者以90％的比率位居榜首，而高危患者仅为42％，中危患者的62％也不容乐观。由于各种因素影响，我国肾癌患者生存率低于以上数据。肾癌的病因目前并不明确，可能与肥胖、吸烟、高血压及高血压治疗、遗传等因素有关，其中遗传性肾癌占肾癌总数的2-4％。肾癌的发病过程比较隐秘，早期患者常无明显症状，但当患者出现“肾癌三联征”(血尿、疼痛、肿块)时即提示肾癌已发展到晚期，错过了最佳的治疗时期，因此对肾癌的早期诊断和早期治疗显得尤为重要。

肾癌早期并无明显的症状，因其位置较隐蔽，较难发现。肾癌的诊断，除了依据“肾癌三联征”的临床症状外，主要依据影像学检查，包括腹部超声(US)、核磁共振成像(MRI)及X射线计算机断层扫描(CT)。超声检查目前多用彩色超声，可以鉴别肾实质性肿瘤和肾囊性肿块，但是即使超声造影也很难与其它肾脏实质性病变区别；CT是目前肾癌诊断最常用和最重要的手段，理论上可以清晰的显示肾实质瘤的部位、范围、形态，可发现早期癌变的肾脏，增强后肿瘤一般均会强化，且透明细胞癌则类似于肝癌呈现“快进快出”强化方式；MRI可以从各个角度清晰的显示肿瘤的形态，侵犯的范围及粘连程度，主要是对肾癌的分期较明确，另外有助于诊断是否合并癌栓。

JAK3基因所编码的蛋白是一种受体酪氨酸激酶，是Janus激酶家族的一员，该家族包括JAK1、JAK2、JAK3和TYK2。JAK3主要表达在免疫细胞中，在被白介素激活后通过酪氨酸磷酸化传递信号。JAK/STAT是一条非常重要的信号通路，许多细胞因子如IFN、IL-2等和生长因子如EGF、CSF等都通过该信号传导途径诱导细胞的增殖、分化和凋亡。因此寻找JAK3基因上的DNA标志物对肾癌的诊断和预后评估有重要的作用。

发明内容

为了克服现有技术中的问题，本发明提供一种JAK3启动子甲基化的检测引物组合物、应用及检测方法，通过设计检测引物组合物，利用焦磷酸测序技术检测JAK3启动子cg04557677甲基化的水平，该方法灵敏度及准确性高，对于肾癌的病理分期及早期检测、预后和风险评估具有重要的意义。

为了实现上述目的，本发明通过以下技术方案实现：

本发明第一方面提供一种JAK3启动子甲基化的检测引物组合物，所述引物组合物包括上游引物cg04557677-F、下游引物cg04557677-Rbio和测序引物cg04557677-S，所述cg04557677-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述g04557677-Rbio的核苷酸序列如SEQID NO.2所示，所述cg04557677-S的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

在一个优选的实施方案中，所述JAK3启动子甲基化位点为cg04557677，所述cg04557677位于基因启动子转录起始位点上游340bp处。

本发明第二方面提供一种JAK3启动子甲基化的检测引物组合物在制备JAK3启动子甲基化检测工具中的应用。

在一个优选的实施方案中，所述检测工具包括但不限于作为单独检测试剂、检测试剂盒。

本发明还提供一种JAK3启动子甲基化的检测引物组合物在制备肾癌检测检测工具中的应用。