[发明专利]一种鉴定橄榄油掺杂的检测方法

说明书

本发明公开了一种鉴定橄榄油掺杂的检测方法，包括以下步骤：步骤一、引物设计：针对NCBI库中棕榈脂肪酸合成的基因设计并筛选；步骤二、待检测橄榄油的DNA提取；步骤三、实时荧光定量PCR反应：在所述待检测DNA油样中加入引物对GL1、GL2、EO1、EO2及TY2进行扩增，以在40个循环内是否读取到Ct值为标准，判断是否得到阳性扩增，据此判断橄榄油是否掺杂。本发明能够有效的从橄榄油中鉴别出掺入的其他油品。

技术领域

本发明涉及生物检测的技术领域，尤其涉及一种鉴定橄榄油掺杂的检测方法。

背景技术

橄榄油以其独特的理化特性和营养价值越来越受到人们的青睐，其不饱和脂肪酸高达 82％-87％，油酸、亚油酸、亚麻油酸含量的比例是最适合人体需要的比例。橄榄油具有抗氧化、预防癌症、美容等功效，价格比其他植物油要高得多。然而有的高价的橄榄油中会掺入低价的植物油或者其他初榨橄榄油及橄榄油果渣等。这种掺假油单从颜色、气味等外观上很难进行辨别真伪，严重损害了消费者的健康和权益。因此，为保障消费者的权益和健康，开发一种橄榄油真伪的鉴定方法，对控制食品质量安全和杜绝橄榄油掺假事件有着重要意义。

近年来，橄榄油掺杂的鉴定技术主要有原子转换质谱、核磁共振、光谱分析、高效液相色谱及其他方法。然而，由于橄榄油的化学组成成分随着生长季节及环境的变化而变化，通过理化方法无法准确鉴别橄榄油真伪。由于精炼食用植物油经过脱胶、脱酸、脱色等复杂的加工过程，其核酸遭到严重的破坏，含量非常低，再加上植物油的主要成分是脂类物质，水溶性的DNA含量相当少且质量差。提取时经常会遇到提不到DNA或是提到少量DNA 但却扩增不出来的各种情况。因此，提取橄榄油中DNA的重点在于如何有效、方便的富集和提取橄榄油中DNA。橄榄油中残留的微量核酸说明代表物种特异性的基因可能被保留下来，不同物种其遗传性质都有不同的特异性，可通过检验其特异性基因来鉴别物种。因此基于DNA分析的分子生物学方法为鉴定橄榄油掺杂的检测提供了有力保障。

有鉴于此，本发明人研究和设计了一种鉴定橄榄油掺杂的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鉴定橄榄油掺杂的检测方法。

为了实现上述目的，本发明解决其技术问题所采取的技术方案是：

一种鉴定橄榄油掺杂的检测方法，包括以下步骤：

步骤一、引物设计：针对NCBI库中棕榈脂肪酸合成的基因设计并筛选：

针对橄榄油，筛选出第一引物对GL1及第二引物对GL2,所述第一引物对GL1包括上游引物GL1F及下游引物GL1R，所述第二引物对GL2包括上游引物GL2F及下游引物GL2R，所述GL1F、GL1R、GL2F、GL2R的核苷酸碱基序列分别如序列表SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:4所示；

针对目标检测物，筛选出第一引物对EO1及第二引物对EO2，所述第一引物对EO1及第二引物对EO2根据实际目标检测物的NCBI库中棕榈脂肪酸合成的基因设计并筛选得到；

作为实时荧光定量PCR的内参，采用引物对TY2，所述引物对TY2包括上游引物TY2F及下游引物TY2R，所述TY2F及所述TY2R的核苷酸碱基序列分别如序列表SEQ ID NO:5 及SEQ ID NO:6所示；

步骤二、待检测橄榄油的DNA提取：采用质粒抽提试剂盒提取，得到待检测DNA油样；

作为实施例的优选方式，所述质粒抽提试剂盒采用上海碧云天生物技术有限公司生产销售的质粒抽提试剂盒D0026。

步骤三、实时荧光定量PCR反应：在所述待检测DNA油样中加入引物对GL1、GL2、EO1、EO2及TY2进行扩增，以在40个循环内是否读取到Ct值为标准，判断是否得到阳性扩增，据此判断橄榄油是否掺杂。