[发明专利]用于膀胱癌检测的标志物及检测试剂盒

说明书

本发明属于生物医学检测技术领域，具体涉及一种用于膀胱癌检测的标志物及检测试剂盒。本申请所述标志物包括核基质蛋白22(NMP22)、癌胚抗原(CEA)、膀胱肿瘤抗原(BTA)和细胞角蛋白19片段(CYFRA21‑1)；所述检测试剂盒采用吖啶酯直接化学发光，用吖啶酯直接标记抗体(抗原)，与待测标本相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成包被抗体‑待测抗原‑吖啶酯标记抗体复合物，加入激发液，不需要催化剂即分解、发光。本发明建立了一种多肿瘤标志物的组合，进而通过多个指标的联合检测提高膀胱癌的检测特异性和敏感性，当对膀胱癌患者尿液检测时，具有较高的敏感度和特异度，可以对膀胱癌患者早期筛查、治疗效果和术后复发进行动态监测。

技术领域

本发明属于生物医学检测技术领域，具体涉及一种用于膀胱癌检测的标志物及检测试剂盒。

背景技术

肿瘤是一类严重威胁人类健康，具有高发病率和高死亡率的疾病。膀胱癌是泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤，早期症状隐匿，患者就诊时多处于中晚期。发病率位于泌尿系统中恶性肿瘤首位，具有非常高的复发率和临床复杂性。在恶性肿瘤中，膀胱癌发病率排第六位，病死率排第四位。

目前膀胱肿瘤的诊断主要以尿液检测、影像学(KUB、IVP、CT、MRI、超声等)检查、膀胱镜检查等为主。膀胱肿瘤初次发现主要以表浅性的肿瘤为主，影像学检查对于表浅、初期的膀胱肿瘤诊断能力有限，膀胱镜检查为有创检查，有创检查费用高昂且还会造成泌尿系统感染、出血等并发症，所以这些常用的诊断膀胱肿瘤的方法并不适用于膀胱肿瘤的筛查。尿液检测是目前较为理想的检测方法，为无创标本，可提供蛋白质、RNA及 DNA来源。因此，尿液是比较理想的用于检测肿瘤分子标志物的标本。

对于膀胱癌的筛查和复查，应尽量减少病人的痛苦，降低检测的成本，减轻患者的负担。肿瘤分子标志物是一种可以判断肿瘤发生、发展甚至预后的指示物。但单一的肿瘤标志物难以特异性地诊断膀胱癌。因此建立一种能够辅助，甚至替代尿脱落细胞学检测的无创、经济、高效、准确、快捷的方法尤为重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于膀胱癌检测的标志物及检测试剂盒，旨在建立一种多肿瘤标志物的组合，用于膀胱癌的早期筛查，通过多种膀胱癌肿瘤标志物的联合应用可以提高膀胱癌的诊断准确性。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种用于膀胱癌检测的标志物，所述标志物包括核基质蛋白22 (NMP22)、癌胚抗原(CEA)、膀胱肿瘤抗原(BTA)和细胞角蛋白19 片段(CYFRA21-1)。

一种上述用于膀胱癌检测的标志物在制备用于膀胱癌检测的检测试剂或检测试剂盒中的应用。

优选的，所述检测试剂盒的检测方法为化学发光免疫分析方法，具体为双抗体夹心化学发光免疫分析法。

优选的，所述检测试剂盒包括：抗体包被的磁微粒、吖啶酯标记的抗体、校准品、激发液A、激发液B和洗涤液，所述抗体为标志物对应的抗体。

优选的，所述抗体包括：NMP22抗体、CEA抗体、BTA抗体、和 CYFRA21-1抗体；更优选的，所述抗体包括：核基质蛋白22(NMP22) 单克隆抗体、癌胚抗原(CEA)单克隆抗体、膀胱肿瘤抗原(BTA)单克隆抗体和细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)单克隆抗体。。

优选的，所述抗体包被的磁微粒包括：NMP22抗体包被的磁微粒、CEA 抗体包被的磁微粒、BTA抗体包被的磁微粒、和CYFRA21-1抗体包被的磁微粒；更优选的，所述的磁微粒的粒径为1-3μm；

更优选的，所述抗体包被的磁微粒通过如下方法制备：取磁微粒用 EDC溶液活化后，加入相应抗体进行分子偶联；再用含牛血清白蛋白的 0.0.1mol/L磷酸盐缓冲液pH7.4进行封闭；将封闭后的抗体包被的磁微粒置于2～8℃保存备用。