[发明专利]用于快速培养肿瘤类器官的培养基、方法以及试剂盒

权利要求书

1.一种用于培养肠癌类器官的培养基，其特征在于，所述培养基由培养基组分和添加剂组分组成，其中，

所述培养基组分中由Advanced DMEM/F12和无菌蛋清提取液组成；

所述添加剂组分由以下组成：HEPES，1-10 mM；GlutaMAX，1-5 mM；B27，1%-2%（v/v）；N2，1%-2%（v/v）；N-acetylcysteine，0.1-1 mM；R-spondin-1，100-500 ng/ml；Noggin，10-100ng/ml； EGF，10-200 ng/ml；Nicotinamide，1-10 mM；gastrin I，5-10 nM；A83-01，200-500nM；ProstaglandinE2，1-20 nM；SB202190，5-10 μM；bFGF，10-500 ng/ml； FGF4，10-500ng/ml；FGF10，10-500 ng/ml；Y-27632 dihydrochloride，5-10 μM；

所述无菌蛋清提取液制备方法：取1-3天的新鲜鸡蛋，分离蛋清分别过100 μm、70μm、40μm细胞滤网，收集液再经负压吸引过0.22 μm滤器制得无菌蛋清提取液；

所述添加剂组分占所述培养基总体积的3%-5%。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述无菌蛋清提取液的浓度为20-30%（v/v）。

3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述bFGF的浓度为10-100 ng/ml；所述FGF4的浓度为10-100 ng/ml；所述FGF10的浓度为10-100 ng/ml。

4.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，

所述添加剂组分进一步包括青霉素、链霉素和两性霉素B混合液；

任选地，所述青霉素、链霉素和两性霉素B混合液中所述青霉素浓度为100-200 U/mL；所述链霉素浓度为100 - 200 μg/ml；所述两性霉素B的浓度为250– 500 ng/mL。

5.权利要求1-4中任一项所述的培养基在培养肠癌类器官中的用途。

6.一种培养肠癌类器官的方法，其特征在于，所述方法包括：

1）将肠癌样本进行消化处理，以便获取肠癌细胞团；

2）利用权利要求1-4中任一项所述的培养基培养所述肠癌细胞团，以便获取肠癌类器官。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述消化处理包括利用组织消化液对所述肠癌样本进行消化，以便获取含有肠癌细胞团的细胞悬液，

其中，所述组织消化液包括透明质酸酶以及Dispace type II；

任选地，所述组织消化液进一步包括胶原蛋白酶IV；

任选地，所述透明质酸酶的浓度为10-100 μg/mL；

任选地，所述Dispace type II的浓度为50 - 200 μg/mL；

任选地，所述胶原蛋白酶IV的浓度为100-1000 U/mL。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述组织消化液进一步包括培养基Advanced DMEM/F12、Y-27632 dihydrochloride以及任选的青霉素、链霉素和两性霉素B混合液；所述Y-27632 dihydrochloride的浓度为1-20 μM；所述青霉素、链霉素和两性霉素B混合液中所述青霉素浓度为100-200 U/mL；所述链霉素浓度为100 - 200 μg/ml；所述两性霉素B的浓度为250–500 ng/mL。