[发明专利]一种用于羊肚菌菌丝的定量检测方法

权利要求书

1.一种用于羊肚菌菌丝的定量检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1、标准品及待测样品预处理：取羊肚菌标准品或羊肚菌待测菌丝样品，清理后，冻干得到羊肚菌标准品冻干菌丝或羊肚菌待测菌丝样品冻干菌丝；

S2、标准品及待测样品制备：所得羊肚菌标准品冻干菌丝及羊肚菌待测菌丝样品冻干菌丝分别使用外切β-葡聚糖酶进行酶解反应后，利用酶解反应产物分别配制成标准样品液及待测样品液；

S3、利用所得标准样品液及待测样品液进行ELISA双抗夹心检测，定量检测羊肚菌菌丝。

2.根据权利要求1所述的用于羊肚菌菌丝的定量检测方法，其特征在于：S1所述清理，包括：取羊肚菌标准品或羊肚菌待测菌丝样品，加入无菌水，进行第一次震荡水洗；过滤后取菌丝，加入甲醇/乙醇混合溶液震荡醇洗；离心后取沉淀，再加入无菌水，进行第二次震荡水洗，离心后取沉淀。

3.根据权利要求2所述的用于羊肚菌菌丝的定量检测方法，其特征在于：S1所述清理还包括确定震荡醇洗时间的步骤：

S11，确定震荡醇洗时间的初选范围(a，b)；a取值2-5min，b取值7-10；

S12，取经过第一次煎煮过滤后的滤渣10个样品，分别按煎煮时间a和a+(b-a)/n，进行煎煮，过滤后得到醇洗液，n取值5-15；测定醇洗液中的干扰物A的含量，分别记为向量X1和X2；

S13，通过下式计算X1和X2的均一度：

若t1和t2均大于-1.35，则确定第二次震荡醇洗时间为a；

若t1和t2之一小于-1.35，则重复S12、S13，增加第二次震荡醇洗时间，直至t1和t2均大于-1.35。

4.根据权利要求3所述的用于羊肚菌菌丝的定量检测方法，其特征在于：所述干扰物A包括糖类、酯类及其他羊肚菌菌丝中包括的干扰其定量检测的物质。

5.根据权利要求2所述的用于羊肚菌菌丝的定量检测方法，其特征在于：S1所述清理还包括确定震荡水洗时间的步骤：在震荡水洗期间测定水洗液中的乙醇浓度，确定震荡水洗时间点的方法为：当0.03＜Δu(i)＜0.09时；

其中，Δu(i)对应两次测试浓度时间间隔内乙醇浓度的变化量；K_i为常数，取值为8-13；f(i)为第i次采样时偏差，f(i-1)为第i-1次采样时偏差，f(i-2)为第i-2次采样时偏差；T_z为采样周期，为3-5s，T_I为积分时间，为20-50s；T_w为微分时间，20-70s。

6.根据权利要求2所述的用于羊肚菌菌丝的定量检测方法，其特征在于：S1中所述第一次震荡水洗，加入的无菌水质量为原始菌丝质量的4-15倍，温度15-20摄氏度，摇床转速30-60rpm，震荡时间3-5min；所述震荡醇洗，温度10-15摄氏度，摇床转速20-40rpm；所述第二次震荡水洗，加入的无菌水质量为原始菌丝质量的20-30倍，温度15-20摄氏度，摇床转速30-60rpm。

7.根据权利要求6所述的用于羊肚菌菌丝的定量检测方法，其特征在于：S1中所述震荡醇洗时间取2-10min，S1中所述第二次震荡水洗时间取3-5min。

8.根据权利要求1所述的用于羊肚菌菌丝的定量检测方法，其特征在于：S2所述酶解反应包括：所得羊肚菌标准品冻干菌丝或羊肚菌待测菌丝样品冻干菌丝加入去离子水中，加入外切β-葡聚糖酶，进行酶切反应，灭酶后水洗，离心取沉淀，冻干，在液氮环境下充分研磨，之后分别加入去离子水配制成标准样品液及待测样品液。