[发明专利]一种九州虫草-半枝莲双向固体发酵提高虫草素含量的方法

说明书

一种九州虫草‑半枝莲双向固体发酵提高虫草素含量的方法，包括如下步骤：步骤一：取实验室保存的九州虫草菌种，接种在斜面培养基上，进行活化；步骤二：在无菌条件下，每120mL液体培养基中接种3‑5小块斜面培养基上的菌种，在23℃下，避光震荡培养3‑5d得到种子液；步骤三：取步骤二所得的九州虫草种子液，接种于固体培养基，在23℃的温度条件下避光培养5d，转为光照培养25d；光照强度200勒克斯，每天光照10h；发酵30d后，将发酵产物于阴凉处风干，置于‑20℃冰箱中保存。本发明培养基中添加半枝莲能够有效的的提高虫草素的含量；同时本发明以九州虫草真菌作为发酵菌种固体发酵中药半枝莲，可以进一步开发具有良好功效的抗癌菌药物，这也是我们未来的科研方向。

技术领域

本发明属于九州虫草培育领域，具体地说是一种九州虫草-半枝莲双向固体发酵提高虫草素含量的方法。

背景技术

九州虫草(Cordyceps kyushuensis Kob)是迄今发现的唯一以豆天蛾幼虫为寄主的虫草真菌。初步药理、药效研究表明，九州虫草具有良好的清除羟基自由基和超氧阴离子自由基的能力，其抗氧化性能与冬虫夏草基本相当。不同提取物对于非小细胞肺癌、人白血病细胞株U937、HL-60、人肝癌细胞株Bel-7402等均有显著的抑瘤作用，并可抑制小鼠S180肉瘤及艾氏腹水瘤的生长，延长生存期，呈现出良好的抗肿瘤药用前景。虫草素是虫草属中一种主要的生物活性物质，分子式为C10H13N5O3。近年来被报道具有多种生理活性，例如，抗肿瘤、抗衰老、抗病毒、抗真菌和增强机体免疫力等。但是现在九州虫草培育过程中存在虫草素含量不高的问题，从而导致其价格居高不下，影响其使用范围。

发明内容

本发明提供一种九州虫草-半枝莲双向固体发酵提高虫草素含量的方法，用以解决现有技术中的缺陷。

本发明通过以下技术方案予以实现：

一种九州虫草-半枝莲双向固体发酵提高虫草素含量的方法，包括如下步骤：

步骤一：取实验室保存的九州虫草菌种，接种在斜面培养基上，放置在恒温恒湿培养箱中，在23℃的温度条件下，避光培养7-9d，进行活化；

步骤二：在无菌条件下，每120mL液体培养基中接种3-5小块斜面培养基上的菌种，在23℃下，避光震荡培养3-5d得到种子液；

步骤三：取步骤二所得的九州虫草种子液，接种于固体培养基，放置在恒温恒湿培养箱中，在23℃的温度条件下避光培养5d，待九州虫草菌丝长满培养基表面后转为光照培养25d；光照强度200勒克斯，每天光照10h；发酵30d后，将发酵产物于阴凉处风干，置于-20℃冰箱中保存。

如上所述的一种九州虫草-半枝莲双向固体发酵提高虫草素含量的方法，所述的固体斜面培养基配方为：马铃薯18％-12％，葡萄糖1％，酵母提取物0.2％，蛋白胨1％，磷酸二氢钾1.5％，硫酸镁0.06％，维生素B10.01％，琼脂1.5％-2％。

如上所述的一种九州虫草-半枝莲双向固体发酵提高虫草素含量的方法，所述的液体培养基的配方为：马铃薯20％，葡萄糖2％，酵母提取物2％，蛋白胨1％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，维生素B10.01％。

如上所述的一种九州虫草-半枝莲双向固体发酵提高虫草素含量的方法，所述的固体培养基的包括如下物质：大米20g，蛋白胨6g，KH2PO41g，MgSO41g，VB10.75g葡萄糖3g，酵母提取液6g，麸皮2g，半枝莲粉末4-8g。

如上所述的一种九州虫草-半枝莲双向固体发酵提高虫草素含量的方法，所述的各物质混合后在121℃条件下高压灭菌20min。

如上所述的一种九州虫草-半枝莲双向固体发酵提高虫草素含量的方法，所述的步骤三得到的发酵物干粉粉碎，过60目筛，按质量与体积比1：10加入超纯水，50℃超声提取30min，离心，收集上清液，重复提取3次，合并上清液，得含有虫草素的溶液。