[发明专利]一株解淀粉芽孢杆菌及其应用

权利要求书

1.一种解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述菌株的分类命名为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens BA-HS，于2020年8月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2020389。

2.如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌在作为宿主表达1,4-α-葡聚糖分支酶基因中的应用。

3.一种重组菌，其特征在于，所述重组菌以权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌为宿主表达编码目的蛋白的基因。

4.如权利要求3所述的重组菌，其特征在于，所述目的蛋白为1,4-α-葡聚糖分支酶，所述1,4-α-葡聚糖分支酶的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

5.一种重组菌的构建方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：

步骤一、培养如权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌：

挑取经过活化稳定培养的解淀粉芽孢杆菌单菌落接种于LB液体培养基中过夜培养，按照培养基体积的1-2%取解淀粉芽孢杆菌的过夜培养物接种于LB+0.5M山梨醇液体培养基中，在30-45°C、150-220rpm转速下培养3-6h，使得OD600为0.8-1.2，将培养液冰浴5-10min，2-4°C下5000-8000rpm离心2-5min离心收集菌体；

步骤二、制备解淀粉芽孢杆菌的感受态细胞：

在5000-8000rpm离心8-10min漂洗所述步骤一收集到的菌体，然后将菌体吹悬于0.5M山梨醇+0.5M甘露醇+10%甘油电转培养基中，即得感受态细胞；

步骤三、电转化：

将质粒加入所述步骤二得到的感受态细胞中，加入预冷的电击杯进行电转，电击后立即加入1mL 由LB+0.5M山梨醇+0.38M甘露醇组成的复苏培养基中，在30-45℃温度下，150-220rpm摇床上，培养1-3h后涂布于含有质粒所携带的抗性抗生素的LB培养基上继续培养，30-45℃温度下培养16-24h后从长出的菌落中筛选转化成功的菌株。

6.如权利要求5所述的构建方法，其特征在于，步骤一中，所述LB培养基的组分为：胰蛋白胨：10g/L，酵母提取物：5g/L，NaCl：10g/L和25g/L琼脂粉，最后用蒸馏水补充体系至1L，121℃高温高压灭菌15-20min；所述培养基的pH为5.2-8.4。

7.如权利要求5所述的构建方法，其特征在于，步骤三中，所述质粒为pHT01、pUB18或pWB980；所述加入质粒的量为0.2-2μg；所述含有抗性抗生素的LB培养基中抗生素的终浓度为100-200μg/mL。

8.如权利要求5所述的构建方法，其特征在于，步骤三中，所述电转时质粒添加量为：0.2-2μg；所述电转仪设置条件为：电压1.8-2.2kV，电击时间4.5-5ms，电阻100-200Ω。