[发明专利]一种无刺蜂蜂蜜中海藻酮糖的分离和检测方法

说明书

本发明属于蜂蜜中有效成分的检测领域，具体涉及一种无刺蜂蜂蜜中海藻酮糖的检测方法。本发明所述方法包括通过液相色谱对待检测的无刺蜂蜂蜜中的海藻酮糖进行分离的操作；所述液相色谱分离的过程中选择Hi‑Plex Pb色谱柱。本发明首次实现了无刺蜂蜂蜜中海藻酮糖的分离，且该方法简单、快捷，有利于后续进行海藻酮糖的大规模提取和应用。

技术领域

本发明属于蜂蜜中有效成分的检测领域，具体涉及一种无刺蜂蜂蜜中海藻酮糖的检测方法。

背景技术

无刺蜂（Stingless bees）属于膜翅目（Hymenoptera）、蜜蜂科（Apidae）、麦蜂族（Meliponini）昆虫，由于尾部蛰针退化，被名为无刺蜂，主要生活在热带和亚热带地区，分布于中国的台湾省、云南和海南等热带地区。无刺蜂身材小，飞行能力较低，是小型植物的主要授粉者，它可采集巢穴周围开花的汁液、植物或昆虫分泌物，并储存于用蜂胶和蜂蜡的混合物制成的球型罐中，即为无刺蜂蜂蜜。研究发现无刺蜂蜂蜜中含有丰富的营养成分，如多酚类化合物等，具有显著的药理活性和药用价值，例如抗氧化、消炎、抑菌、促进伤口愈合、抗糖尿病、治疗眼部疾病、调节机体代谢、调节肠道菌群等，因此会被认为是一种重要的保健食品，越来越受消费者的喜爱。无刺蜂蜂蜜的口感酸甜，水分含量较高，主要由糖类组成，约占其干重碳水化合物的95%-97%。

海藻酮糖(Trehalulose, α-D-glucopyranosyl-1,1-D-fructose)是一种还原性二糖，极少量存在于天然普通蜂蜜中，难以用化学合成，只有某些微生物可以转化蔗糖(sucrose, α-D-glucopyranosyl-1,2-D-fructofuranose)的结构，生成异麦芽酮糖(isomaltulose/palatinose, α‐D‐glucopyranosyl‐1,6‐D‐fructofuranose)和海藻酮糖^[26]。这些蔗糖异构体比蔗糖具有更高的酸稳定性，在某种程度上可以增加物种的竞争优势。考虑到蔗糖异构体还没有副作用的报导，这些化合物可能是理想的蔗糖替代品。异麦芽酮糖的甜度为蔗糖的30%，易于结晶并用作固体添加剂；但海藻酮糖的甜度是蔗糖的60%，具有高度水溶性，可作为填充剂、保湿剂和质地增强剂，适合用于果冻和果酱等高甜食品加工。海藻酮糖的消化吸收慢于蔗糖，会降低单糖和胰岛素释放到血液中的速率，可用于糖尿病患者的食品和饮料；并且海藻酮糖不作为能引起龋齿的变形链球菌的葡萄糖基转移酶的底物，可抑制变形链球菌对玻璃表面的蔗糖依赖粘附性，显著降低龋齿病，防止蛀牙。除了作为食品成分的优点外，海藻酮糖的还原性使其成为良好的化学修饰前体，并且还被用于制作糖醇，作为低热量的甜味剂和生物相容性聚合物。海藻酮糖具有优秀的生物学功能，然而目前还未针对我国无刺蜂蜂蜜中海藻酮糖的操作步骤简单的检测方法。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种简单的检测无刺蜂蜂蜜中海藻酮糖的方法。

本发明所述方法包括以通过液相色谱对待检测的无刺蜂蜂蜜中的海藻酮糖进行分离的操作；所述液相色谱分离的过程中选择Hi-Plex Pb色谱柱。

海藻酮糖是一种二糖，与蜂蜜中常见的其他成分如蔗糖、麦芽糖等的性质十分接近，因此分离存在非常大的难度，本发明发现选择上述色谱柱可实现对海藻酮糖的理想分离，分离操作简单快捷，分离效果好，可为后续地检测奠定良好的基础。

本发明所述海藻酮糖的结构式为：

优选的，所述液相色谱分离的过程中，以水作为流动相。选择Hi-Plex Pb色谱柱，以水作为流动相即可实现海藻酮糖与其他成分的有效分离，使用其他有机溶剂分离效果不好。

优选的，所述液相色谱分离的过程中，柱温为45~55 ℃。