[发明专利]基于外泌体miRNA-206表达水平的胃癌恶液质早期诊断试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于外泌体miRNA‑206表达水平的胃癌恶液质早期诊断试剂盒，该试剂盒包括Hsa‑miR‑206的实时定量PCR扩增引物。采集未确诊恶液质的胃癌患者外周血，离心得到血浆，提取血浆中的外泌体RNA，将其中的miRNA反转录成cDNA作为模板，通过实时定量PCR检测血浆外泌体中的Hsa‑miR‑206的含量，从而为预测胃癌恶液质提供重要参考。

技术领域

本发明属于肿瘤医学领域，涉及检测血浆外泌体中Hsa-miR-206的含量，以及用于根据外泌体miRNA-206表达情况对胃癌恶液质进行早期诊断的试剂盒。

背景技术

胃癌(Gastric cancer，GC)是最常见的消化道恶性肿瘤之一，具有高发病率、高死亡率的特点，发病率和死亡率逐年上升。尽管随着医疗技术的不断发展，癌症的治疗手段正在不断被人们所研究，但是由于胃癌发病率高，且具有早期不易诊断的特点，提高胃癌患者的生存率依然面临巨大挑战。恶液质是一种多因素代谢综合症，恶液质患者临床主要表现为体重减轻和肌肉萎缩(伴随或不伴随脂肪丢失)，肿瘤引起的恶液质最为常见，称肿瘤恶液质(Cancer cachexia)。研究表明，超过20％的肿瘤恶液质患者直接死于恶液质，恶液质在胃肠道肿瘤中尤为常见，80％的胃癌患者都会出现恶液质。肿瘤患者发生恶液质后对化疗药毒性更敏感，生活质量也降低，因此严重影响肿瘤患者的预后。目前尚缺乏诊断和治疗恶液质的有效手段，许多研究都集中在预测肿瘤恶液质发生的生物标记物方面。但一般血清标志物的检测对恶液质的预测价值不高，例如CEA、CA19-9、CA724等肿瘤标志物，仅能预测发生肿瘤的可能性，而不能预测恶液质的发生。

外泌体的功能之一是作为细胞间通讯的介质，与肿瘤的增殖、凋亡、耐药和转移息息相关。而作为主要的活性物质之一的非编码RNA，是外泌体发挥以上功能的生物学基础。非编码RNA主要包括微小RNA(microRNA，miRNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)，以及环状RNA(ciRNA)等。其中，miRNA是一类长度为19～25nt的内源单链RNA，其通过转录后基因沉默机制对下游靶mRNA发挥精细调节作用，影响细胞的恶性转化、非锚定依赖性生长、上皮间质转化、血管生成、药物耐受等诸多肿瘤恶性表型。外泌体能够携带miRNA进入循环系统，通过自分泌、旁分泌和内旁分泌的方式将其囊泡结构中所含miRNA(即外泌体miRNA)运送至特异的靶细胞，使外泌体中的miRNA不仅能够逃避降解，而且促进了细胞与细胞之间、组织与组织之间的联系。

随着miRNA的发现，众多miRNA被证实参与炎症反应、诱导转移以及介导癌症侵袭，甚至参与骨骼肌中蛋白质的合成和降解通路。肿瘤的发生能触发肿瘤细胞与肌肉细胞的交流，引起肌肉中蛋白质的降解和代谢。肿瘤发展过程中miRNA表达谱的变化能影响肌肉相关的疾病的发生。改变miRNA的含量能够影响肌生成，导致骨骼肌肥大或萎缩，进而导致恶液质的发生，其机制可能是通过诱导肌细胞内凋亡相关信号通路或泛素蛋白酶系统激活，从而促进肌细肉中蛋白质降解。