[发明专利]一种梨叶原生质体的提取方法在审
| 申请号： | 202110725839.1 | 申请日： | 2021-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN113388568A | 公开（公告）日： | 2021-09-14 |
| 发明（设计）人： | 许建锋;高成昱;马辉;张海霞;于新乐;李英丽;张江红;张玉星 | 申请（专利权）人： | 河北农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 崔自京 |
| 地址： | 071001 河北*** | 国省代码： | 河北;13 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 原生 质体 提取 方法 | ||
1.一种梨叶原生质体的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将梨叶片置于酶解液中酶解，得到酶解产物，所述酶解液包括如下质量浓度的组分：纤维素酶0.5％～2.0％w/v、离析酶0.2％～0.5w/v、果胶酶0.1～0.5％w/v、甘露醇0.3～0.7mol/L、2-(N-吗啉基)乙磺酸20mM、氯化钾20mM、氯化钙10mM和0.05～0.1％牛血清蛋白；
(2)向所述酶解产物中加入等体积的W5清洗液，过筛取滤液，所述W5清洗液包括如下质量浓度的组分：2-(N-吗啉基)乙磺酸2mM、氯化钾5mM、氯化钙125mM、氯化钠154mM和葡萄糖5mM；
(3)将所述滤液离心后得沉淀，洗涤后得梨叶原生质体。
2.如权利要求1所述的一种梨叶原生质体的提取方法，其特征在于，步骤(1)中所述梨叶片为苗龄为30～50d的梨组培苗叶片。
3.如权利要求1所述的一种梨叶原生质体的提取方法，其特征在于，步骤(1)中所述梨叶片和酶解液的质量体积比为1:10。
4.如权利要求1所述的一种梨叶原生质体的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中的酶解条件为25～28℃、黑暗条件下、静置酶解11～12h。
5.如权利要求1所述的一种梨叶原生质体的提取方法，其特征在于，酶解前将所述梨叶片处理成0.5～1mm宽的丝。
6.如权利要求1所述的一种梨叶原生质体的提取方法，其特征在于，步骤(2)中所述过筛为过300目筛。
7.如权利要求1所述的一种梨叶原生质体的提取方法，其特征在于，步骤(3)中所述离心为100～150r/min条件下离心4min。
8.如权利要求1所述的一种梨叶原生质体的提取方法，其特征在于，步骤(3)中洗涤采用W5清洗液。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于河北农业大学，未经河北农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202110725839.1/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
