[发明专利]蛋鸭环状RNA circ_2136及其检测试剂、方法与应用

说明书

本发明公开了蛋鸭环状RNA circ_2136及其检测试剂、方法与应用，属于基因工程技术领域，其中所述蛋鸭环状RNA circ_2136对应的cDNA的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示。本发明克隆得到了蛋鸭环状RNA circ_2136的全长序列，并设计了相应的特异性引物用于鉴定环状RNA是否正确成环，并分析检测所述蛋鸭环状RNA circ_2136在待测样品中是否表达及其相对表达量；同时本发明通过构建蛋鸭环状RNA circ_2136的过表达载体，使其稳定表达circ_2136，经转染蛋鸭小肠上皮细胞，首次发现了所述环状RNA circ_2136可以促进肠上皮细胞增殖，进而调控肠道屏障功能，这为环状RNA调控蛋鸭肠屏障功能障碍的分子机制带来了更深层次的认知以及新的思路。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及蛋鸭环状RNA circ_2136及其检测试剂、方法与应用。

背景技术

circ RNA是一类不具有5'末端帽子和3'末端poly(A)尾巴、并以共价键形成环形结构的非编码RNA分子。在反向剪接过程中，下游5'端剪接位点与上游3'端剪接位点反向连接，在连接位点形成一个具有3',5'磷酸二酯键的circ RNA分子。circ RNA与传统线性RNA不同，circ RNA以环状形式存在，其3'头端和5'尾端以共价键连接而成，使其避免被RNA核酸外切酶和脱支酶降解，这是其表达稳定，不易降解的重要原因。circ RNA根据来源可分为三大类：(1)外显子来源的circ RNA(exonic circ RNA，ecirc RNA)，ecirc RNA是由一个或多个外显子首尾拼接而成，其占circ RNA的绝大多数(超过80％)；(2)外显子-内含子来源的circ RNA(exon-intron circ RNA，EIcirc RNA)，EIcirc RNA由编码基因的外显子序列和内含子序列组成，不同于仅由外显子序列组成的特异RNA；(3)内含子来源的circ RNA(circular intronic RNA，ciRNA)，ciRNA广泛存在于细胞核中，由内含子自身环化形成。

circ RNA主要通过三种机制发挥调控功能：(1)作为miRNA的海绵吸附体调控基因的表达(ceRNA)；(2)circ RNA结合RNA结合蛋白(RBP)以形成RNA-蛋白复合物(RPC)，调控线性亲本基因的转录；(3)已经有数篇论文研究发现circ RNA可编码蛋白质，发挥生物学功能。

肠屏障功能障碍分子机制的相关研究众多，但circ RNA调控肠道屏障功能障碍的研究却鲜见报道。早在1993年，Capel等人就在在小鼠精子决定基因SRY中发现了环状RNA，并且SRY也被证实可以吸附miR-138，发挥miRNA海绵作用。Liu等人在败血症大鼠肠黏膜组织中发现circ-0001105表达显著下调，而上调circ-0001105表达后发现，肠黏膜通透性、肠道炎症反应及氧化损伤程度均显著降低。但circ RNA具有多种途径发挥调控作用，例如可以吸附miRNA、通过影响其靶基因的表达来实现功能。众所周知，circ RNA具有强大的生物学功能，但其在家畜肠道屏障功能中的作用及作用机制还有待进一步研究。

发明内容

本发明针对现有技术的空白，提供了一种蛋鸭环状RNA circ_2136及其检测试剂、方法与应用，并验证了所述蛋鸭环状RNA circ_2136在蛋鸭肠道屏障功能中的具体作用机制，为进一步解析蛋鸭肠屏障功能障碍的作用机理提供了新的思路。

本发明的目的之一在于提供一种蛋鸭环状RNA circ_2136，所述蛋鸭环状RNAcirc_2136对应的cDNA的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示。

本发明的目的之二在于提供一种载体，所述载体中包含上述蛋鸭环状RNA circ_2136。

进一步地，所述载体为过表达载体PLCDH-circ_2136。