[发明专利]一种细胞内质网靶向的自释放型蛋白运输载体LCA2及其应用

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，具体公开了一种细胞内质网靶向的自释放型蛋白运输载体LCA2，所述蛋白运输载体LCA2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。所述LCA2载体作为一种内质网靶向的蛋白和药物分子的自释放型运输载体，能够用于运送融合在其N端或与其偶联的蛋白药物。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种细胞内质网靶向的自释放型蛋白运输载体LCA2及其应用。

背景技术

随着生物医药领域的不断发展，新技术的持续突破，生物药物得到了飞速发展。与化学药物相比，生物药物具有活性高、特异性强、靶向性好、毒副作用少等特点。而蛋白药物又是生物药物的主体，新品种蛋白药物数量呈指数级增长，在药物市场所占比例也逐年增加。

目前已有的细胞内药物递送方式主要有细胞膜电穿孔、细胞膜机械穿孔、细胞穿膜肽、两性离子聚合物载体、病毒载体以及纳米微粒载体等等。相较于电穿孔或机械穿孔，亦或通过两性化学分子或病毒载体这些递送方式，使用细胞穿膜肽作为运输蛋白的载体更适用于临床研究和治疗。细胞穿膜肽是一种能够自发穿过质膜的短链多肽，可通过共价或非共价结合，将与之连接的物质(如：寡核苷酸DNA、RNA，肽，蛋白质，纳米颗粒，脂质体等)送入细胞，甚至直接运送到亚细胞器。

内质网是单层膜形成的囊状、泡状和管状膜结构,并相互连接形成连续的网膜系统。通常它内层与核膜相连，外层与质膜相连，系统的联系了细胞核、细胞质和细胞膜这三大细胞结构，是细胞内蛋白质合成、脂质合成、物质运输和糖类代谢的主要场所。此外，它还参与细胞骨架形成、细胞内物质的传送、药物代谢及解毒过程。研究表明内质网功能的紊乱与许多人类疾病的发病机制相关，如癌症、炎症性疾病、代谢性疾病、骨质疏松症及神经退行性疾病等。

蛋白类药物往往是大分子，无法同小分子化学药物一样直接穿过细胞膜进入病变细胞进行治疗，因其缺乏有效的胞质递送策略，对于细胞内的靶标往往无法发挥其功效。因此，开发安全有效的细胞内药物递送载体尤为重要。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种细胞内质网靶向的自释放型蛋白运输载体LCA2，所述载体LCA2作为一种内质网靶向的蛋白和药物分子的自释放型运输载体，能够用于运送融合在其N端或与其偶联的蛋白药物。

本发明提供了自释放酶敏感位点Cs，所述自释放酶敏感位点Cs的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示

本发明还提供了包含上述位点Cs的细胞内质网靶向的自释放型蛋白运输载体LCA2，所述蛋白运输载体LCA2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

进一步地，所述蛋白运输载体LCA2由连接子Linker、自释放酶敏感位点Cs与穿模结构域A2组成。

进一步地，所述连接子Linker的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

进一步地，所述穿模结构域A2的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

本发明还提供了上述细胞内质网靶向的自释放型蛋白运输载体LCA2的构建方法，所述蛋白运输载体LCA2可采用多肽的化学合成方法构建，或是以LCA2融合蛋白的获取与检测的方法通过基因工程技术构建。

进一步地，所述LCA2融合蛋白的获取与检测的方法包括载体蛋白LAC2的制备、LCA2融合蛋白的表达纯化、LCA2融合蛋白的细胞内定位和模式靶蛋白在细胞内的分离检测。

进一步地，所述LCA2融合蛋白可通过但不限于大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞、植物细胞及昆虫细胞等利用基因工程技术获取。

本发明还提供了上述细胞内质网靶向的自释放型蛋白运输载体LCA2在运载生物活性蛋白或蛋白药物中的应用

进一步地，所述蛋白药物包括但不限于多肽、基因工程蛋白药物、单克隆抗体、基因工程抗体和重组疫苗。

附图说明