[发明专利]一种来源于藏鸡蛋的抗氧化活性肽及其用途

说明书

本发明公开了一种藏鸡蛋特有的抗氧化活性肽，氨基酸序列VASPLYNVTWR，本发明还公开了所述多肽的制备方法。本发明提供多肽是从藏鸡蛋酶解产物中分离鉴定得到，该多肽具有较多的疏水性氨基酸和较强的抗氧化活性，可用于开发抗氧化功能保健品。该多肽既可以从藏鸡蛋酶解产物中分离获得，也可以通过人工合成方法获得，具有原料充足，工艺简单，易于大规模生产等优点。

技术领域

本发明涉及一种藏鸡蛋特有的抗氧化活性肽及其用途。

背景技术

多肽是两个或两个以上氨基酸以肽键相连的化合物，具有多种生物活性，能够在在生物体内起重要生理作用。随着科学技术的发展以及人们对健康生活的追求，食源活性肽以其易消化、功效快的等优点，越来越受到人们的青睐。生物活性肽在肠道中被吸收并完整地渗透到血液中并发挥全身或局部的有益作用。蛋白质是多肽的天然生产原料，蛋白在蛋白酶水解过程中产生多肽，这些生物活性肽具有较高的生物活性以及高安全性，它们可能是药物和营养品的潜在的天然替代品。

当机体受到外界环境(如光，热和辐射)的影响，会产生很多自由基。自由基影响氧化应激平衡，进而影响机体健康状态。当过量的自由基形成，它们会超过保护性酶如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶的保护作用，从而导致脂质氧化、细胞凋亡等一系列的副作用产生。这一类的氧化反应，会对人体的健康造成了一定的危害，如风湿性关节炎、糖尿病、动脉硬化等。

在高原低氧和高紫外线辐射环境下，机体容易受到氧化应激损伤。因此，立足当地资源优势的抗氧化产品开发具有十分重要的意义。抗氧化肽可用于预防氧化应激相关疾病，鸡蛋中含有大量的抗氧化肽。以藏鸡蛋中的多肽为主要研究对象，采用生物信息学分析，评估和筛选出藏鸡蛋中的抗氧化多肽并加以功能活性验证，从而为地方蛋品的资源开发以及精深加工提供数据上的支撑和科学依据。

发明内容

本发明的目的是提供一种藏鸡蛋中特有的具有抗氧化活性的多肽。

上述目的是通过以下技术方案实现的：

首先将藏鸡蛋经酶解，然后将酶解产物进行Nano-ESI-LC-MS/MS分离鉴定，获得多肽的分子量和序列信息，最后通过生物信息学方法对分离鉴定的多肽进行功能活性预测并最终获得抗氧化活性片段。

该多肽的氨基酸序列为VASPLYNVTWR，活性评分为0.630，分子量大小为1305.50Da。

最后对获得的多肽序列进行人工合成并验证合成产物的抗氧化功能，证实其具有清除DPPH自由基的作用，具有良好的抗氧化活性。

本发明提供的多肽既可以从藏鸡蛋中分离获得，也可以通过人工合成方法获得，当采用前者方法制备时，包括以下步骤：

1)将藏鸡蛋冷冻后去壳去膜，碾碎使蛋清和蛋黄均匀混合，冻干后放置在-80℃储存；

2)将冻干粉在液氮条件下研磨成粉末，用水溶解并调节pH至7.5，然后向溶液中加入胰蛋白酶，37℃酶解10-20小时，然后将酶灭活，离心取上清液；

3)将上清液过固相萃取柱除杂；

4)采用HPLC法分离所需的肽段。

当采用合成方法时，可采用本领域所熟知的方法进行制备，本发明提供的一种合成方法如下：

1)称取二氯树脂放入反应器中，加入二氯甲烷溶胀30min，然后抽掉二氯甲烷，加入序列中第一个氨基酸V、N,N-二异丙基乙胺、N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷溶液，用氮气鼓泡反应1h，然后加入甲醇，反应30min，抽掉反应液，用N,N-二甲基甲酰胺和甲醇洗净；

2)加入哌啶去除9-芴甲氧羰基保护基，洗净，取树酯用茚三酮检测为兰色；