[发明专利]人源化BCMA抗体和BCMA-CAR-T细胞

说明书

本发明涉及一种人源化BCMA单链可变片段(scFv)，该片段包括具有SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的VH和具有SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的VL。本发明还涉及一种BCMA嵌合抗原受体(CAR)融合蛋白，其自N‑末端到C‑末端包括：(i)本发明的单链可变片段(scFv)，(ii)跨膜结构域，(iii)至少一个共刺激结构域，和(iv)激活结构域。本发明优选的共刺激结构域是CD28或41‑BB。本发明的人源化BCMA‑CAR‑T细胞在体外和体内均具有特异性杀伤活性，并在CAR‑T细胞中分泌细胞因子IFN‑γ。

技术领域

本发明涉及人源化BCMA抗体和特异性减少多发性骨髓瘤生长，在过继免疫基因治疗肿瘤领域中有用的人源化BCMA-CAR-T细胞(PMC309含共刺激结构域CD28，PMC750含共刺激结构域4-1BB)。

背景技术

免疫疗法正在成为一种非常有前途的癌症治疗方法。T细胞或T淋巴细胞是我们免疫系统的武装力量，不断寻找外来抗原并将异常(癌症或经感染细胞)和正常细胞区分开来。利用CAR(嵌合抗原受体)构建体对T细胞进行基因修饰已成为设计肿瘤特异性T细胞最常见的方法。将靶向肿瘤相关抗原(TAA)的CAR-T细胞输入患者体内(称为过继细胞转移或ACT)是一种有效的免疫治疗方法[1,2]。与化疗或抗体相比，CAR-T技术的优点在于经重新编程的工程化T细胞能在患者体内实现增殖和持续存在(“一种活的药物”)[1,2]。

CAR通常由在N-末端部分的单克隆抗体来源的单链可变片段(scFv)、铰链、跨膜结构域和若干胞内共刺激结构域：(i)CD28，(ii)CD137(4-1BB)、CD127或其它共刺激结构域，与CD3-ζ结构域串联组成(图1)[2；3]。CAR的演变经历了从第一代(无共刺激结构域)到第二代(有一个共刺激结构域)再到第三代CAR(有若干个共刺激结构域)。具有多个共刺激结构域的CAR(所谓的第三代CAR)增强了细胞毒性CAR-T细胞活性，显著改善CAR-T细胞的持久性，从而增强其抗肿瘤活性。

图1示出了CAR的结构。左侧：第一代(无共刺激结构域)结构，中间：第二代(一个共刺激结构域CD28或4-1BB)，右侧：第三代CAR(两个或若干个共刺激结构域)。该图来自Golubovskaya,Wu,Cancers,2016[3]。

BCMA

B细胞成熟抗原(BCMA)是一种细胞表面受体，又称CD269和肿瘤坏死因子受体超家族成员17(TNFRSF17)，由TNFRSF17基因编码。该受体主要在成熟的B淋巴细胞中表达，并在大多数多发性骨髓瘤(MM)中过表达[4]。现有用于治疗多发性骨髓瘤的靶向BCMA的疗法包括单克隆抗体、双特异性抗体和T细胞免疫疗法、CAR-T疗法[4][5]。

BCMA结构和信号传导

人BCMA蛋白由184个氨基酸组成：1-54-胞外结构域；55-77-跨膜结构域；78-184-胞浆结构域。BCMA的氨基酸序列如图2所示。BCMA缺乏信号肽，并与其他受体诸如BAFF受体以及跨膜激活物和亲环素配体相互作用物和钙调节物(TACI)类似[5]。这些受体在B细胞成熟和分化为浆细胞中发挥重要作用。它们的配体包括在MM患者中表达增高的BAFF和APRIL[5]。单克隆抗体靶向受体-配体相互作用，同时CAR-T细胞疗法结合BCMA以杀伤MM细胞。BCMA还与TRAF1、2、3、5和6相互作用。

发明内容

为了给多发性骨髓瘤的提供新的治疗方法，本发明提供了一种人源化BCMA的单链可变片段(scFv)，其包括具有SEQ ID NO:5所示氨基酸的VH和具有SEQ ID NO:6所示氨基酸的VL。

在一些实施方式中，本发明的scFV进一步包括VH和VL之间的接头。

在具体实施方式中，本发明的scFV具有SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。