[发明专利]高效液相色谱分离测定头孢克洛原料药及其杂质的方法

说明书

本发明属于分析检测技术领域，具体涉及高效液相色谱分离测定头孢克洛原料药及其杂质的方法，采用的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，WatersXbridgeC18，4.6mm×250mm，3.5μm；流动相A为磷酸二氢钠溶液，流动相B为磷酸二氢钠溶液‑乙腈，线性梯度洗脱；柱温为20℃；流速为每分钟1.0ml/min；检测波长为220nm。本发明可以实现头孢克洛峰与各杂质的完全分离，其与各杂质的分离度均大于1.5，各杂质间的分离度均大于1.5，分离效率高、分析速度快、检测灵敏度高，可以更好的对头孢克洛原料药中可能存在的杂质进行检测，有利于更好控制头孢克洛原料药的质量。

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，具体涉及高效液相色谱分离测定头孢克洛原料药及其杂质的方法。

背景技术

头孢克洛是一种半合成的第二代口服头孢菌素类抗生素药物，头孢克洛自1979年获FDA批准，1982年在美国成功上市以来，因其具有广谱、高效和良好的临床安全性，它已成为目前治疗细菌感染的重要药物之一。头孢克洛的杀菌机制是使转肤酶失活，干扰细菌细胞壁最终阶段的合成，阻止粘肽原的交联，对葡萄球菌、链球菌属、肺炎球菌及大肠杆菌等革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有很强的杀灭作用。

头孢克洛原料药在合成过程中的起始原料、中间体、终产物类似物及降解产物等均可能成为其杂质，从而影响产品的质量，进而影响最终疗效。因此，对原料药进行质量控制是药物研发工作中的重点和难点。

目前，与头孢克洛原料药相关的杂质有以下几种：

目前，尚未见关于头孢克洛与上述杂质分离测定方法的文献报道，因此寻找一种分离测定头孢克洛与上述杂质的方法对于控制头孢克洛原料药的质量、提高药品疗效、降低毒副作用迫在眉睫，对头孢克洛原料药的质量控制有着重要意义。

发明内容

针对上述问题，本发明提出了一种高效液相色谱分离测定头孢克洛原料药及其杂质的方法，该方法对杂质分离能力和检出能力更强。

本发明所述的高效液相色谱分离测定头孢克洛原料药及其杂质的方法，采用的色谱条件为：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，WatersXbridge C18，4.6mm×250mm，3.5μm；流动相A为磷酸二氢钠溶液，流动相B为磷酸二氢钠溶液-乙腈，以体积比计，磷酸二氢钠溶液∶乙腈＝55∶45，线性梯度洗脱；柱温为20℃；流速为每分钟1.0ml/min；检测波长为220nm。

所述磷酸二氢钠溶液的制备过程为：取二水合磷酸二氢钠7.8g，加水溶解并稀释至1000ml，用磷酸或1mol/L氢氧化钠调节pH值至4.7。

所述的线性梯度洗脱程序为：